原代細(xì)胞實(shí)驗(yàn)步驟：
以胚胎小鼠為例 1．取材：將孕鼠拉頸椎處死，投入75%酒精浸泡數(shù)秒，提出孕鼠控掉酒精，放置于蠟盤中用大頭針固定。用手術(shù)器械逐層分離皮膚和肌肉組織，打開腹腔。注意不同的解剖層次使用不同的器械。后取出雙角置于無(wú)菌平皿內(nèi)。 2．用Hanks液洗滌3次，剪開取出胚胎。血液和筋膜等組織。 3．用彎頭剪把胚胎盡量剪碎，每個(gè)組織塊小于1mm3。在操作時(shí)應(yīng)盡量將平皿蓋半蓋住平皿以防空氣中塵埃落下污染組織。再用Hanks液洗滌2~3次，自然沉淀。用吸管吸去上清液。以下可按兩種方法進(jìn)行，即消化法和組織塊培養(yǎng)法。 4．若使用消化法，則將組織塊放人三角燒瓶?jī)?nèi)加入10~30mL0.125%胰蛋白酶，37℃磁力攪拌消化20多min。然后加入少量血清終止消化。用幾層無(wú)菌紗布過(guò)濾。取過(guò)濾液，800r/min離心5~10min收集細(xì)胞。棄上清，加入帶有雙抗的培養(yǎng)基，放入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)。 注：細(xì)胞分離的方法各實(shí)驗(yàn)室不同，所采用的消化酶也不相同（如膠原酶，透明質(zhì)酶等）。 5．若進(jìn)行組織塊培養(yǎng)，則不做步驟4，加入幾滴血清于組織塊中，再用彎頭吸管將組織塊懸液吸起。在一小培養(yǎng)瓶中逐個(gè)鋪展開，注意將瓶底涂抹均勻。將瓶子翻轉(zhuǎn)倒置后在37℃培養(yǎng)箱內(nèi)放置2－3h。待組織塊微干與瓶壁粘牢后再輕輕將瓶子翻轉(zhuǎn)過(guò)來(lái)，從邊角加入4~5mL培養(yǎng)基，使細(xì)胞接觸到培養(yǎng)基，放培養(yǎng)箱內(nèi)繼續(xù)進(jìn)行培養(yǎng)。
人小腸粘膜上皮細(xì)胞
組織來(lái)源
小腸組織
貨號(hào)
P-X1289
產(chǎn)品規(guī)格
5×105
生長(zhǎng)特性
貼壁
產(chǎn)品類別
人原代細(xì)胞
細(xì)胞形態(tài)
上皮樣 多角形細(xì)胞
細(xì)胞詳述：
小腸位于腹中，上端接幽門與胃相通，下端通過(guò)闌門與大腸相連，是食物消化吸收的主要場(chǎng)所。一般根據(jù)形態(tài)和結(jié)構(gòu)變化將小腸分為三段，分別為十二指腸，空腸和回腸。
小腸壁結(jié)構(gòu)一般分 4層，由外向內(nèi)依次為：漿膜層，平滑肌層，粘膜下層和粘膜層。粘膜層又分為3層：靠近粘膜下層的是一層平滑肌，稱為粘膜肌層。其次為結(jié)締組織，又稱為固有層。后面向腸腔的是一層柱狀上皮細(xì)胞構(gòu)成的粘膜。
小腸粘膜有縱行和橫行皺襞，并有無(wú)數(shù)細(xì)小的指狀突起，稱為絨毛。絨毛的基底處粘膜內(nèi)陷成管狀，稱為利貝屈恩氏隱窩。隱窩基底部的上皮細(xì)胞不斷地進(jìn)行有絲分裂，產(chǎn)生新細(xì)胞。隱窩上皮中還有許多杯狀細(xì)胞，它分泌粘液，起滑潤(rùn)食物和保護(hù)粘膜的作用。
細(xì)胞特性：
1）細(xì)胞來(lái)源于人正常小腸組織。
2)細(xì)胞鑒定：廣譜角蛋白（PCK）熒光染色為陽(yáng)性。
3)經(jīng)鑒定細(xì)胞純度高于90%。
4)不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、、酵母和。
5)細(xì)胞生長(zhǎng)方式：上皮樣，多角形細(xì)胞，貼壁培養(yǎng)。
我們推薦使用 Delf原代上皮細(xì)胞培養(yǎng)體系 作為體外培養(yǎng)的培養(yǎng)基。
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注意事項(xiàng)：
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