一抗操作步驟:
一抗的操作步驟主要包括封閉、?一抗孵育和洗滌。?
封閉:?這一步驟的目的是為了防止非特異性的蛋白質結合位點與抗體結合,?從而引起非特異的染色和背景。?通常使用惰性蛋白質或非離子去污劑來封閉膜上的未結合位點,?以降低抗體的非特異性結合。?常用的封閉試劑有5%的BSA或脫脂奶粉,?緩沖液一般選擇PBST或TBST。?封閉條件通常為室溫或37℃緩慢搖動1~2小時,?特殊情況也可4℃過夜。?封閉完成后需要進行洗膜,?以去除膜上未結合的封閉試劑。?
一抗孵育:?在一抗孵育之前,?需要參考一抗的說明書,?按照適當比例用封閉液稀釋一抗。?吸盡封閉液后,?立即加入稀釋好的一抗,?室溫或4℃在搖床上緩慢搖動孵育1~2小時。?如果一抗孵育一小時效果不佳,?可以在4℃緩慢搖動孵育過夜。?然后回收一抗,?加入Western洗滌液,?在搖床上緩慢搖動洗滌5-10分鐘,?共洗滌3次。?如果結果背景較高,?可以適當延長洗滌時間并增加洗滌次數(shù)。?
洗滌:?洗滌的目的是為了洗去一抗的非特異性結合,?洗滌的效果直接影響結果背景的深淺。?建議使用PBST或TBST作為洗滌液,?其中的Tween20有助于去除非特異性的結合,?減少背景。?洗滌的次數(shù)和時間根據(jù)具體實驗來確定,?建議清洗3-5次,?每次5分鐘。
信號轉導蛋白亞基8抗體
貨號
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規(guī)格
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價格
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用途
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BJ006374
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50ul
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1380
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僅供科研實驗
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BJ006374
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100ul
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2380
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僅供科研實驗
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BJ006374
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200ul
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3480
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僅供科研實驗
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商品屬性:
英文名稱:COPS8
中文名稱:信號轉導蛋白亞基8抗體
別 名;COP9 homolog; COP9 signalosome complex subunit 8; Cops8; CSN8; CSN8_HUMAN; hCOP9; JAB1 containing signalosome subunit 8; JAB1-containing signalosome subunit 8; SGN8; Signalosome subunit 8.
研究領域;細胞生物 發(fā)育生物學 染色質和核信號 信號轉導 干細胞 激酶和磷酸酶
抗體來源;Rabbit
克隆類型;Polyclonal
交叉反應;(predicted: Human, Mouse, Rat, Rabbit, )
產品應用;WB=1:500-2000 ELISA=1:5000-10000 IHC-P=1:100-500 IHC-F=1:100-500 ICC=1:100-500 IF=1:50-200 (石蠟切片需做抗原修復)
not yet tested in other applications.
optimal dilutions/concentrations should be determined by the end user.
理論分子量;23kDa
細胞定位;細胞核 細胞漿
性 狀;Liquid
濃 度;1mg/ml
免 疫 原;KLH conjugated synthetic peptide derived from human COPS8: 101-200/209
亞 型;IgG
純化方法;affinity purified by Protein A
保存條件;Shipped at 4℃. Store at -20 °C for one year. Avoid repeated freeze/thaw cycles.
注意事項;This product as supplied is intended for research use only, not for use in human, therapeutic or diagnostic applications.
產品介紹:
Component of the COP9 signalosome complex (CSN), a complex involved in various cellular and developmental processes. The CSN complex is an essential regulator of the ubiquitin (Ubl) conjugation pathway by mediating the deneddylation of the cullin subunits of SCF-type E3 ligase complexes, leading to decrease the Ubl ligase activity of SCF-type complexes such as SCF, CSA or DDB2. The complex is also involved in phosphorylation of p53/TP53, c-jun/JUN, IkappaBalpha/NFKBIA, ITPK1 and IRF8/ICSBP, possibly via its association with CK2 and PKD kinases. CSN-dependent phosphorylation of TP53 and JUN promotes and protects degradation by the Ubl system, respectively.
抗體注意事項:
確定抗體的名字和特性:?注意抗體的中英文名字、?它名、?亞型等信息,?這些信息對于選擇正確的抗體至關重要。?
明確實驗類型:?了解你的實驗類型(?如ELISA、?WB、?IHC、?ICC或FACS)?,?因為抗體的說明書通常會列出該抗體經驗證過的實驗類型。?如果說明書沒有提及某種應用類型,?并不意味著該抗體不適用于該實驗,?只是表示尚未經過該實驗驗證。?
選擇適當?shù)膶嶒灅颖痉N屬:?確定你的實驗樣本是來自人類、?小鼠還是大鼠等,?因為抗體的說明書會列出該抗體經試驗驗證過的物種。?
考慮樣本蛋白的結構性質:?了解樣本蛋白的結構性質有助于選擇的抗體,?特別是當樣本蛋白在提取和處理過程中可能會變性時,?這會影響抗體的親和反應。?
單多克隆抗體的選擇:?單克隆抗體特異性強但親和力相對小,?而多克隆抗體特異性稍弱但親和力強。?根據(jù)實驗需求選擇合適的抗體。?
注意抗體的特異性:?原的類型對抗體對靶蛋白的特異性有顯著影響。?應選擇針對已充分表征的原產生的抗體,?避免使用不合適或質量差的原產生的抗體。?
封閉液的選擇:?封閉液的選擇應根據(jù)抗體說明書進行,?常用的封閉液包括脫脂奶粉和BSA。?封閉液的目的是封閉非特異性結合位點,?降低背景噪音3。?
抗體孵育注意事項:?使用干凈的孵育盒子,?避免油脂等雜物沾到膜上造成非特異信號。?如果一次性需要檢測多個蛋白,?可以考慮將膜剪開或采用其他技術如抗體洗脫液處理后再次使用膜
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