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RT(逆轉(zhuǎn)錄)反應(yīng)合成 cDNA

RT(逆轉(zhuǎn)錄)反應(yīng)合成 cDNA:

1. 按下表配制 RT 反應(yīng)體系(20 μL 體系)

2. 70℃保溫 5 分鐘變性模板后立即冰浴。

3. 嚴(yán)格按順序加入 6μL RT Buffer(含 dNTP)和 2μL MMLV 逆轉(zhuǎn)錄酶(含 RI),

反應(yīng)終體積為 20μL

4. 42℃保溫 60 分鐘。此步為 RT 反應(yīng)。

5. 70℃保溫 10 分鐘以終止反應(yīng),然后放置在冰上待用。合成的 cDNA 可以直接作為 PCR 模板使用,丌需要純化。