高效液相色譜法在食品**檢測(cè)中的應(yīng)用!

食品貿(mào)易的全球化使廣大消費(fèi)者受益，大量高品質(zhì)、價(jià)格合理、**的食品應(yīng)運(yùn)而生，滿足著廣大消費(fèi)者的需要。日趨加速的城市化狀況導(dǎo)致食品的制作、運(yùn)輸、貯存、銷(xiāo)售需求不斷增加。同時(shí)還會(huì)有一些不法制假商販制造或販賣(mài)偽劣食品，甚至在食品中摻入有毒化學(xué)品，給消費(fèi)者造成極大傷害，這就需要有一套完整的監(jiān)測(cè)監(jiān)督機(jī)制。作為降低食源性危害的有效手段，許多食品**項(xiàng)目正越來(lái)越側(cè)重于從農(nóng)田到餐桌的整個(gè)過(guò)程，雖然國(guó)家在保證食品**方面作大量的工作，每年仍有相當(dāng)數(shù)量的消費(fèi)者因進(jìn)食受污染的食品而中毒、發(fā)病、乃至死亡。當(dāng)今農(nóng)產(chǎn)品、食品**已成為世人十分關(guān)注的熱門(mén)話題，食品**監(jiān)測(cè)面臨著嚴(yán)峻挑戰(zhàn)，因此，急需建立快速調(diào)查食源性**和監(jiān)測(cè)食品污染的措施和方法。本文就高效液相色譜(HPLC)技術(shù)在食品**檢測(cè)方法中的應(yīng)用概況作一綜述。

    食品不**因素及HPLC應(yīng)用范圍

    據(jù)報(bào)道，每年世界上發(fā)生的食品污染病例在7000萬(wàn)例以上。食源性**的爆發(fā)已引起媒體的廣泛關(guān)注和消費(fèi)者的關(guān)心。當(dāng)前食品中的不**因素主要表現(xiàn)在以下幾個(gè)方面[2]：微生物、寄生蟲(chóng)等生物污染；環(huán)境污染；農(nóng)用、獸用化學(xué)物質(zhì)的殘留；自然界存在的天然**；營(yíng)養(yǎng)素不平衡；食品加工和貯藏過(guò)程中產(chǎn)生的**；食品添加劑的使用；食品摻偽；新開(kāi)發(fā)的食品資源及新工藝產(chǎn)品；包裝材料。食品中*常見(jiàn)的有毒有害物質(zhì)是有機(jī)合成農(nóng)藥、獸藥殘留物及污染物和致病菌。

    高效液相色譜法(HPLC)是上世紀(jì)60年代末70年代初發(fā)展起來(lái)的一種新型分析分離技術(shù)。它是由現(xiàn)代高壓技術(shù)與傳統(tǒng)的液相色譜方法相結(jié)合，加上高效柱填充物和高靈敏檢測(cè)器所發(fā)展起來(lái)的新型分離分析技術(shù)，是以經(jīng)典液相色譜法為基礎(chǔ)，引入了氣相色譜的理論與實(shí)踐方法，流動(dòng)相改為高壓輸送，采用高效固定相在線檢測(cè)手段發(fā)展而成的分離分析方法，分離機(jī)制是靠被分離組分的分子與流動(dòng)相分子爭(zhēng)奪吸附表面活性中心的吸附能力差別而分離(可用吸附系數(shù)Ka衡量吸附能力的差異)，是現(xiàn)代分離分析的重要手段，隨其分離檢測(cè)技術(shù)的日益完善，已被廣泛應(yīng)用于各個(gè)學(xué)科中。由于它只要求樣品能制成溶液，而不需要?dú)饣虼瞬皇軜悠窊]發(fā)性的約束。對(duì)于揮發(fā)性低，熱穩(wěn)定性差，分子量大的高分子化合物以及離子型化合物尤為有利，如氨基酸、蛋白質(zhì)、生物堿、核酸、甾體、脂類(lèi)、維生素、***等分子量較大，沸點(diǎn)較高的合成**以及無(wú)機(jī)鹽類(lèi)。所以說(shuō)HPLC具有適用范圍廣、分離效率高、速度快、流動(dòng)相可選擇范圍寬、靈敏度高、色譜柱可反復(fù)使用、流出組分容易收集、**等優(yōu)點(diǎn)。世界上約有80%的有機(jī)化合物可以用HPLC來(lái)分析測(cè)定[1]。

    HPLC對(duì)食品添加劑及農(nóng)藥的測(cè)定

    蘇丹(Sudan)色素是一種人工合成染料，在化工生產(chǎn)中主要用于對(duì)油類(lèi)、蠟和肥皂的染色。有關(guān)研究表明，蘇丹Ⅰ號(hào)(Sudan Ⅰ)會(huì)導(dǎo)致鼠類(lèi)患癌，它對(duì)人類(lèi)肝細(xì)胞也顯現(xiàn)出可能致癌的特性。李軍[3]等建立了食品中4種蘇丹色素的高效液相色譜同時(shí)測(cè)定方法。采用乙腈提取后經(jīng)凝膠滲透色譜法對(duì)樣品進(jìn)行凈化，利用反相高效液相色譜法，以乙腈-酸性水溶液為流動(dòng)相，采用梯度洗脫，以二極管陣列檢測(cè)器定性定量測(cè)定食品中的4種蘇丹色素，結(jié)果*低檢出限分別為0.102、0.097、0.074、0.099 mg/kg。阿斯巴甜、糖精鈉、乙?；前匪徕浀忍砑觿?duì)人體有一定的毒害作用。特別是阿斯巴甜，它在體內(nèi)代謝過(guò)程中的主要降解物為苯丙氨酸和天門(mén)冬氨酸，對(duì)于苯丙酮尿病(PKU)患者，因其代謝缺陷，體內(nèi)過(guò)多的苯丙氨酸可影響患者的發(fā)育，所以有該病的患者要禁用添加阿斯巴甜的食品。劉思潔[4]等建立了一種可以同時(shí)測(cè)定飲料中糖精鈉、乙?；前匪徕?、阿斯巴甜的方法，采用C18反向柱，以乙腈-0.02 mol/L硫酸銨溶液(5∶95)為流動(dòng)相，在214 nm波長(zhǎng)處檢測(cè)。結(jié)果以上三種甜味添加劑在飲料中*低檢出限為 4 μg/ml。目前蔬菜水果中不同種類(lèi)農(nóng)藥的殘留測(cè)定方法主要是氣相色譜法(GC)或氣相色譜 -質(zhì)譜法 (GC-MS )，但GC對(duì)沸點(diǎn)高或熱穩(wěn)定性差的農(nóng)藥需進(jìn)行衍生化處理，這樣就不可避免地增加了樣品前處理的難度，也使它的應(yīng)用受到一定程度的限制。李永新[5]等建立了同時(shí)測(cè)定蔬菜水果12種農(nóng)藥殘留的反相高效液相色譜分析方法。將樣品搗碎，用乙酸乙酯超聲提取，經(jīng)Florisil固相萃取柱凈化、正己烷-二氯甲烷( 1∶1)洗脫、氮?dú)獯蹈?、甲醇溶解并定容后，采用高效液相色譜柱分離、紫外檢測(cè)，以外標(biāo)法定量。結(jié)果表明：5種有機(jī)磷農(nóng)藥、6種擬除蟲(chóng)菊酯類(lèi)農(nóng)藥和除草劑二甲戊樂(lè)靈的檢測(cè)限為0.114-2.65 ng。應(yīng)用該法對(duì)從市場(chǎng)上隨機(jī)購(gòu)買(mǎi)的蓮白、小白菜、黃瓜等20個(gè)蔬菜樣品和

    作者簡(jiǎn)介：陸興毅(1975-)，男，廣西田陽(yáng)縣人，主管藥師，理學(xué)士。蘋(píng)果、梨等20個(gè)水果樣品進(jìn)行檢測(cè)，其中氧化樂(lè)果的檢出率分別為55%和45%，辛硫磷的檢出率分別為50%和30%，由此可見(jiàn)，國(guó)家明文規(guī)定的不得用于蔬菜、瓜果的劇毒、高毒農(nóng)藥仍有檢出。

    HPLC對(duì)食品中獸藥殘留物的測(cè)定

    1.鹽酸克侖特羅(俗稱(chēng)瘦肉精)系β2受體興奮劑，禁止作為畜禽類(lèi)生長(zhǎng)促進(jìn)劑使用。近年來(lái)，我國(guó)曾多次報(bào)道了因食用含有鹽酸克侖特羅殘留的豬肉及內(nèi)臟等造成的中毒事件。陳金枝[6]等建立HPLC法測(cè)定豬眼 、豬肝 、豬肺中微量鹽酸克侖特羅，樣品經(jīng)乙醚-丁醇提取，用Hypersil C18色譜柱，甲醇-0.01 moL/L磷酸二氫鉀溶液為流動(dòng)相。結(jié)果樣品中鹽酸克侖特羅*小檢測(cè)量為0.20 ng。用該法對(duì)市場(chǎng)上豬眼、豬肝、豬肺等30份樣品進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果在豬肺中的殘留在檢出限以下，豬眼、豬肝中*大殘留分別為0.96、0.22 mg/kg。

    2.磺胺類(lèi)**是抗感染藥劑，具有**作用，因此在飼料中常常被添加。但是，過(guò)量的**殘留會(huì)損害人體健康。郭根和[7]等采用反相高效液相色譜法，用C18色譜柱、紫外檢測(cè)器，以5 mmol/L NaH2PO4溶液-乙腈溶液為流動(dòng)相，測(cè)定蝦中磺胺二甲基嘧啶、磺胺甲氧基嘧啶、磺胺甲惡唑、磺胺二甲氧基嘧啶、磺胺喹惡啉等5種磺胺類(lèi)**殘留，結(jié)果*低檢測(cè)限為2 μg/kg，符合痕量測(cè)定的要求。

    3.薄海波[8]等采用柱切換直接進(jìn)樣高效液相色譜法測(cè)定蜂蜜中3種四環(huán)素類(lèi)***(土霉素OTC、四環(huán)素TC、金霉素CTC)的殘留量，先用緩沖溶液溶解樣品后，直接進(jìn)樣，以二次蒸餾水作流動(dòng)相在C18預(yù)柱上在線富集和凈化，然后用柱切換閥將預(yù)柱與一個(gè)C18分析柱接通，以草酸溶液-乙腈-甲醇作流動(dòng)相，紫外檢測(cè)器在350 nm處檢測(cè)。結(jié)果各組分回收率大于86%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差小于8.0%，*低檢出濃度為0.005 mg/kg，滿足了日本等國(guó)對(duì)進(jìn)口蜂王漿中土霉素、四環(huán)素、金霉素殘留量(0.05 mg/kg)要求。

    4.孔雀石綠、結(jié)晶紫屬三芳基甲烷化學(xué)物質(zhì)，長(zhǎng)期以來(lái)許多國(guó)家曾將其作為水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)的**劑，可用于魚(yú)類(lèi)高發(fā)的水霉病、原蟲(chóng)病的控制，但是進(jìn)一步研究證實(shí)，孔雀石綠等進(jìn)入人類(lèi)或動(dòng)物機(jī)體后，通過(guò)生物轉(zhuǎn)化可產(chǎn)生致癌、致畸、致突變等副作用 ......