一、服務(wù)介紹
細(xì)胞轉(zhuǎn)染是指將外源分子如DNA,RNA等導(dǎo)入真核細(xì)胞的技術(shù)。目前,將外源物質(zhì)導(dǎo)入細(xì)胞的方法主要分為三大類:1、脂質(zhì)體(或是脂質(zhì)體替代物)轉(zhuǎn)染;2、電轉(zhuǎn);3、病毒感染。轉(zhuǎn)染技術(shù)又可分為瞬時轉(zhuǎn)染和穩(wěn)定轉(zhuǎn)染
基因的功能研究可分為loss-of-function和gain-of-function,即通過過表達(dá)該基因和抑制內(nèi)源基因的表達(dá)的手段來研究某個基因的生物學(xué)功能。常規(guī)轉(zhuǎn)染技術(shù)可分為兩大類,一類是瞬時轉(zhuǎn)染,一類是穩(wěn)定轉(zhuǎn)染(長久轉(zhuǎn)染)。
瞬時轉(zhuǎn)染
服務(wù)介紹
通過脂質(zhì)體介導(dǎo)轉(zhuǎn)染法基因轉(zhuǎn)染技術(shù),將靶基因?qū)爰?xì)胞,一般在轉(zhuǎn)染后48小時左右,靶基因即可在細(xì)胞內(nèi)表達(dá)。根據(jù)不同的實(shí)驗(yàn)?zāi)康模?8小時后即可進(jìn)行靶基因表達(dá)的檢測等實(shí)驗(yàn)。觀察目的基因及其表達(dá)蛋白在某種細(xì)胞中的功能(短時間即可進(jìn)行觀察,但效應(yīng)會很快丟失)
服務(wù)流程
1、接收質(zhì)粒、細(xì)胞
2、細(xì)胞培養(yǎng)
3、轉(zhuǎn)染
4、拍照
5、效率鑒定
客戶提供:
1、構(gòu)建好的外源基因載體,或由本公司進(jìn)行載體構(gòu)建(需提供目的基因名稱、種屬、序列或Gene Accession Number)。
2、待轉(zhuǎn)染的細(xì)胞系(1×106個細(xì)胞,可傳代,倍增時間小于48小時)以及細(xì)胞培養(yǎng)條件的說明。
3、若需要檢測靶基因的表達(dá),需提供相應(yīng)抗體或由公司代購。
交付內(nèi)容
1、構(gòu)建好的瞬時轉(zhuǎn)染細(xì)胞。
2、實(shí)驗(yàn)報告:詳細(xì)實(shí)驗(yàn)步驟及相關(guān)的外源基因表達(dá)分析。
穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞株的構(gòu)建
服務(wù)介紹
穩(wěn)定轉(zhuǎn)染,就是轉(zhuǎn)染的質(zhì)粒DNA整合到宿主細(xì)胞染色體上,使宿主細(xì)胞可長期表達(dá)目的基因及蛋白。需要在瞬時轉(zhuǎn)染基礎(chǔ)上對靶細(xì)胞進(jìn)行篩選或者應(yīng)用高轉(zhuǎn)染效率的病毒,根據(jù)不同基因載體中所含有的抗性標(biāo)志選用相應(yīng)的**進(jìn)行細(xì)胞傳代,從而得到可穩(wěn)定表達(dá)目的基因的細(xì)胞系。
服務(wù)流程
1、接收質(zhì)粒、細(xì)胞
2、細(xì)胞培養(yǎng)
3、轉(zhuǎn)染
4、***篩選
5、得到單克隆細(xì)胞株
6、擴(kuò)增
7、檢測
客戶提供
1、構(gòu)建好的外源基因載體,或選擇由公司構(gòu)建(價格參考載體構(gòu)建)。
2、待轉(zhuǎn)染的細(xì)胞系(1×106個細(xì)胞,可傳代,倍增時間小于48小時)以及細(xì)胞培養(yǎng)條件的說明。
3、提供相應(yīng)抗體
交付內(nèi)容
1、構(gòu)建好的穩(wěn)定表達(dá)細(xì)胞系。
2、實(shí)驗(yàn)報告:詳細(xì)步驟、相關(guān)的外源基因表達(dá)分析等。
二、服務(wù)列表
項(xiàng)目
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備注
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周期
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瞬時轉(zhuǎn)染+鑒定
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鑒定方法為western blot
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10個工作日
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穩(wěn)定轉(zhuǎn)染+鑒定
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鑒定方法為western blot
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45個工作日(貼壁細(xì)胞)
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