染色質(zhì)**共沉淀
真核生物的基因組DNA以染色質(zhì)的形式存在,研究蛋白質(zhì)與DNA在染色質(zhì)環(huán)境下的相互作用是闡明真核生物基因表達機制的基本途徑。與傳統(tǒng)的EMSA技術(shù)相比,染色質(zhì)**沉淀技術(shù)(CHIP)能真實完整地反映結(jié)合在DNA序列上的調(diào)控蛋白,是目前研究體內(nèi)DNA與蛋白質(zhì)相互作用的佳方法。
原理
是在活細胞狀態(tài)下以甲醛固定蛋白質(zhì)-DNA復(fù)合物,超聲將其隨機切斷為長度范圍內(nèi)的染色質(zhì)小片段,然后加入目的蛋白抗體,通過抗體沉淀靶蛋白-DNA復(fù)合物,通過洗脫的方法得到富集的靶蛋白-DNA復(fù)合物,特異性地富集目的蛋白結(jié)合的DNA片段,通過對目的片斷的純化與檢測(PCR分析),從而獲得蛋白質(zhì)與DNA相互作用的信息。
應(yīng)用
1.組蛋白修飾研究
2.轉(zhuǎn)錄調(diào)控分析
3.**開發(fā)研究
4.有絲分裂研究
5.DNA損傷與凋亡分析