色譜柱是HPLC的主要成分，因?yàn)樯V柱負(fù)責(zé)分離樣品成分。樣品與流動(dòng)相一起通過(guò)色譜柱，從色譜柱中分離出其組分。
通常，硅膠填充在高效液相色譜柱中，因?yàn)槠淞胶涂紫堵视兄诔煞址蛛x，并且硅膠也是一種惰性材料，不會(huì)與流動(dòng)相發(fā)生反應(yīng)。因此，硅膠柱可用于分析不同化學(xué)性質(zhì)的化合物。填充在HPLC柱中的物質(zhì)稱(chēng)為固定相。
高效液相色譜柱及其分離技術(shù)
根據(jù)色譜柱的組成和分離方法，有以下不同類(lèi)型的色譜柱。
1） 正相柱
2） 反相柱
3） 離子交換柱
4） 大小排除列
1） 什么是正相高效液相色譜柱：
這種色譜柱的極性固定相比流動(dòng)相多。色譜柱的填料應(yīng)比流動(dòng)相更具極性，且該條件由極性材料二氧化硅實(shí)現(xiàn)。但水的極性比二氧化硅強(qiáng)，因此不使用水，而使用二氯甲烷、己烷和氯仿或它們與乙醚的混合物作為流動(dòng)相。
樣品組分的分離基于樣品組分的極性。極性越高的樣品組分與極性固定相的相互作用越大，導(dǎo)致與極性較低的流動(dòng)相相互作用的極性較小的組分分離。硅膠柱廣泛應(yīng)用于藥 物分析。使用正相色譜柱的色譜柱填料稱(chēng)為正相色譜。
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2） 什么是反相高效液相色譜柱：
在名稱(chēng)所述的反向相位列中，它與正常相位列相反。與極性較高的流動(dòng)相相比，它具有非極性或極性較低的固定相。在反相色譜柱中，鍵合烴（如C8和C18）和其他非極性烴用作固定相，而有機(jī)水溶液（如水-甲醇或水-乙腈混合物）用作流動(dòng)相。
反相色譜柱中樣品組分的分離也是基于樣品組分的極性進(jìn)行的，但其發(fā)生與正相HPLC柱正好相反，因此，這種色譜被稱(chēng)為反相色譜。
3） 什么叫離子交換HPLC柱：
使用這些色譜柱分析容易電離的化合物。這些色譜柱中的固定相保持酸性或堿性，帶有正負(fù)電荷，而流動(dòng)相為極性液體，如水溶液中的鹽溶液。分子的分離是基于分子與帶電固定相之間的吸引離子力而發(fā)生的。由于樣品組分分離過(guò)程中的離子交換，稱(chēng)為離子交換色譜法。
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4）為什么在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中有 尺寸排除HPLC柱：
這些色譜柱中的多孔固定相允許根據(jù)組分的大小進(jìn)行分離。多糖和二氧化硅等聚合物的組合用作這些色譜柱中的固定相。小分子滲透到固定相的孔隙中，而大分子部分滲透到孔隙中。因此，樣品中的大分子比小分子先洗脫，這種色譜法稱(chēng)為尺寸排除色譜法。這些色譜柱通常不用于藥 物化合物的分析。
HPLC柱的長(zhǎng)度不同，從30 mm到250 mm不等，其粒徑或孔隙率為3μ到5μ。這些因素影響樣品分析，因此，在HPLC分析方法開(kāi)發(fā)過(guò)程中，這些因素被認(rèn)為是重要的。根據(jù)待分析化合物的性質(zhì)和流動(dòng)相選擇色譜柱。通常在1000次運(yùn)行后或根據(jù)需要，還應(yīng)不時(shí)評(píng)估柱性能。
