PCR反應的特異性決定因素為:
①引物與模板DNA特異正確的結合;
②堿基配對原則;
③Taq DNA聚合酶合成反應的忠實性;
④靶基因的特異性與保守性。
其中引物與模板的正確結合是關鍵。引物與模板的結合及引物鏈的延伸是遵循堿基配對原則的。聚合酶合成反應的忠實性及Taq DNA聚合酶耐高溫性,使反應中模板與引物的結合(復性)可以在較高的溫度下進行,結合的特異性大大增加,被擴增的靶基因片段也就能保持很高的正確度。再通過選擇特異性和保守性高的靶基因區(qū),其特異性程度就更高。
(2) 靈敏度高
PCR產(chǎn)物的**量是以指數(shù)方式增加的,能將皮克(pg=10-12g)量級的起始待測模板擴增到微克(ug=10-6g)水平。能從100萬個細胞中檢出一個靶細胞;在病毒的檢測中,PCR的靈敏度可達3個RFU(空斑形成單位);在學中zui小檢出率為3個。
(3) 簡便、快速
PCR反應用耐高溫的Taq DNA聚合酶,一次性地將反應液加好后,即在DNA擴增液和水浴鍋上進行變性-退火-延伸反應,一般在2~4 小時完成擴增反應。擴增產(chǎn)物一般用電泳分析,不一定要用同位素,無放射性污染、易推廣。
(4) 對標本的純度要求低
不需要分離病毒或及培養(yǎng)細胞,DNA 粗制品及總RNA均可作為擴增模板。可直接用臨床標本如血液、體腔液、洗嗽液、毛發(fā)、細胞、活PCR技術概論。
訂購信息:
產(chǎn)品名稱:病豬藍耳高致病/NADC-S雙重PCR方法
英文名稱:詳見說明
貨號:BJ-01R5105
產(chǎn)品規(guī)格:48T/盒
運輸:低溫
保存:負20度
有效期:一年
貨期:現(xiàn)貨
【儲存條件及有效期】:
-20℃避光保存,避免反復凍融,有效期6個月。
【適用儀器】:
ABI7300、ABI7500、LightCycler 480、iCycleriQ5、CFX96、SLAN等熒光定量PCR儀。
【樣本采集、存放及運輸】:
u 樣本采集:各類型樣本按照常規(guī)方法采集;
u 存放:樣本在2~8℃條件下保存應不超過72h,-70℃以下可長期保存,但應避免反復凍融(多凍融3次);
u 運輸:采用**或泡沫箱加冰密封進行運輸。
本公司產(chǎn)品僅用于科研。
【自備試劑】:
核酸提取試劑,如QIAGEN QIAamp Viral RNA Mini試劑盒,也可選擇其他合適的核酸提取產(chǎn)品。
組成及試劑配制:
1、 酶標板:一塊(96孔)
2、 標準品(凍干品): 2瓶,請臨用前15分鐘內配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml,蓋好后室溫靜置大約10分鐘,同時反復顛倒/搓動以助溶解,其濃度為200 U/L,然后做系列倍比稀釋(注:不要直接在板中進行倍比稀釋),分別配制成200 U/L,100 U/L,50 U/L,25 U/L,12.5 U/L,6.25 U/L,3.12 U/L,樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標準品:取0.3ml (不要少于0.3ml )200 U/L的上述標準品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中,混勻即可,其余濃度以此類推。
3、 樣品稀釋液:1×20ml。
4、 檢測稀釋液A:1×10ml。
5、 檢測稀釋液B:1×10ml。
使用方法:
一、樣品 RNA 的制備
1、用自選方法抽提病毒樣品 RNA。注意:可以選用本公司生產(chǎn)的一管式病毒 RNAout
2、或柱式病毒 RNAout。
二:RT(逆轉錄)反應合成 cDNA
1. 按下表配制 RT 反應體系(20 μL 體系)
2. 70℃保溫 5 分鐘變性模板后立即冰浴。
3. 嚴格按順序加入 6μL RT Buffer(含 dNTP)和 2μL MMLV 逆轉錄酶(含 RI),
反應終體積為 20μL。
4. 42℃保溫 60 分鐘。此步為 RT 反應。
5. 70℃保溫 10 分鐘以終止反應,然后放置在冰上待用。合成的 cDNA 可以直接作為 PCR 模板使用,丌需要純化。
實驗注意事項:
1)RT-PCR可以檢測組織、細胞、血液、等很多材料,不同的樣本有不同要求,實驗前請充分溝通確認實驗方案和樣本情況;
2)客戶盡可能提供實驗的背景信息、物種、基因準確的名稱和ID號;
3)客戶盡量不要提供DNA或RNA樣品。
4)樣本保存于液氮或干冰,也可以保存于Trizol液中。
實時熒光定量PCR(quantitative real-time PCR,qPCR)是指在PCR反應體系中加入熒光基團,利用熒光信號積累實時監(jiān)測整個PCR進程,通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法。實時熒光定量PCR的化學原理包括探針類和非探針類兩類,探針類是利用與靶細胞序列特異性雜交的探針來指示擴增產(chǎn)物的增加,非探針類是利用熒光染料或者特異性設計的引物來指示擴增的增加。運用該技術可以對DNA、RNA樣品進行定量(包括量和相對定量)和定性分析。
主要服務:DNA或RNA的定量分析、基因表達差異分析、基因分型。
主要技術:引物設計、RNA提取、cDNA合成、qPCR。
S186 1mg Brassinolide 10mM*1mLinDMSO
Tivantinib (ARQ 197) 1mg Dienogest 10mg
MRTO4 Human 500μg Hexacosanoic Acid methyl ester 5mg
4-hydroxy MPT 500μg CD5 Human 1mg
2α-methyl Androsterone 25mg PF-592379 20μg
A 77-01 1g Auranofin 2μg
Pentadecanoyl Ethanolamide 10mM*1mLinDMSO (2'S)-Nicotine-1-oxide 1mg
1alpha, 24, 25-Trihydroxy VD2 1mg SGC-iMLLT 25mg
2-APB (hydrochloride) 500μg A1874 1mg
AVE 0991 1mg GSK3787 50mg
L-748,337 10mM*1mLinDMSO 14(Z)-Eicosenoic Acid 50mg
MYL6B Human 1mg Salvianolic acid F 100g
Fmoc-Pro-Gly-OH 5mg Tritoqualine (Inhibostamin) 5mg
GSTT2 Human 2μg Oleandomycin 100μg
Tris DBA 5mg NVP-BGJ398 phosphate 1mg
病豬藍耳高致病/NADC-S雙重PCR方法植物赤霉素(GA)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
植物草酸氧化酶(OxO)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
植物25羥基維生素D3(25(OH)D3/25 HVD3)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
魚脫碘酶3(DIO3)ELISA檢測試劑盒 96T/48T ELISA 組裝/原裝
魚脫碘酶2(DIO2)ELISA檢測試劑盒 96T/48T ELISA 組裝/原裝
魚脫碘酶1(DIO1)ELISA檢測試劑盒 96T/48T ELISA 組裝/原裝
魚糖胺聚糖(GAG)ELISA檢測試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
魚尿苷二磷酸葡萄糖醛酸轉移酶(UDPGT)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
魚**球蛋白M(IgM)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
魚類主要組織相容性復合體(MHC)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
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