使用方法:
一、樣品 RNA 的制備
1、用自選方法抽提病毒樣品 RNA。注意：可以選用本公司生產(chǎn)的一管式病毒 RNAout
2、或柱式病毒 RNAout。
二：RT（逆轉(zhuǎn)錄）反應合成 cDNA
1. 按下表配制 RT 反應體系（20 μL 體系）
2. 70℃保溫 5 分鐘變性模板后立即冰浴。
3. 嚴格按順序加入 6μL RT Buffer（含 dNTP）和 2μL MMLV 逆轉(zhuǎn)錄酶（含 RI），
反應終體積為 20μL。
4. 42℃保溫 60 分鐘。此步為 RT 反應。
5. 70℃保溫 10 分鐘以終止反應，然后放置在冰上待用。合成的 cDNA 可以直接作為 PCR 模板使用，丌需要純化。
訂購信息：
產(chǎn)品名稱：廣州管圓線蟲(AC)熒光-PCR法
英文名稱：詳見說明
貨號：BJ-01R5003
產(chǎn)品規(guī)格：48T/盒
運輸：低溫
保存：負20度
有效期：一年
貨期：現(xiàn)貨
【儲存條件及有效期】:
-20℃避光保存，避免反復凍融，有效期6個月。
【適用儀器】:
ABI7300、ABI7500、LightCycler 480、iCycleriQ5、CFX96、SLAN等熒光定量PCR儀。
【樣本采集、存放及運輸】：
u 樣本采集：各類型樣本按照常規(guī)方法采集；
u 存放：樣本在2~8℃條件下保存應不超過72h，-70℃以下可長期保存，但應避免反復凍融（多凍融3次）；
u 運輸：采用**或泡沫箱加冰密封進行運輸。
本公司產(chǎn)品僅用于科研。
【自備試劑】:
核酸提取試劑，如QIAGEN QIAamp Viral RNA Mini試劑盒，也可選擇其他合適的核酸提取產(chǎn)品。
組成及試劑配制:
1、 酶標板：一塊（96孔）
2、 標準品（凍干品）： 2瓶，請臨用前15分鐘內(nèi)配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml，蓋好后室溫靜置大約10分鐘，同時反復顛倒/搓動以助溶解，其濃度為200 U/L，然后做系列倍比稀釋（注：不要直接在板中進行倍比稀釋），分別配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標準品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述標準品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中，混勻即可，其余濃度以此類推。
3、 樣品稀釋液：1×20ml。
4、 檢測稀釋液A：1×10ml。
5、 檢測稀釋液B：1×10ml。
實驗注意事項：
1）RT-PCR可以檢測組織、細胞、血液、等很多材料，不同的樣本有不同要求，實驗前請充分溝通確認實驗方案和樣本情況；
2）客戶盡可能提供實驗的背景信息、物種、基因準確的名稱和ID號；
3）客戶盡量不要提供DNA或RNA樣品。
4）樣本保存于液氮或干冰，也可以保存于Trizol液中。
實時熒光定量PCR（quantitative real-time PCR，qPCR）是指在PCR反應體系中加入熒光基團，利用熒光信號積累實時監(jiān)測整個PCR進程，通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法。實時熒光定量PCR的化學原理包括探針類和非探針類兩類，探針類是利用與靶細胞序列特異性雜交的探針來指示擴增產(chǎn)物的增加，非探針類是利用熒光染料或者特異性設(shè)計的引物來指示擴增的增加。運用該技術(shù)可以對DNA、RNA樣品進行定量（包括量和相對定量）和定性分析。
主要服務：DNA或RNA的定量分析、基因表達差異分析、基因分型。
主要技術(shù)：引物設(shè)計、RNA提取、cDNA合成、qPCR。
PCR反應的特異性決定因素為：
①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合；
②堿基配對原則；
③Taq DNA聚合酶合成反應的忠實性；
④靶基因的特異性與保守性。
其中引物與模板的正確結(jié)合是關(guān)鍵。引物與模板的結(jié)合及引物鏈的延伸是遵循堿基配對原則的。聚合酶合成反應的忠實性及Taq DNA聚合酶耐高溫性，使反應中模板與引物的結(jié)合(復性)可以在較高的溫度下進行，結(jié)合的特異性大大增加，被擴增的靶基因片段也就能保持很高的正確度。再通過選擇特異性和保守性高的靶基因區(qū)，其特異性程度就更高。
(2) 靈敏度高
PCR產(chǎn)物的**量是以指數(shù)方式增加的，能將皮克(pg=10-12g)量級的起始待測模板擴增到微克(ug=10-6g)水平。能從100萬個細胞中檢出一個靶細胞；在病毒的檢測中，PCR的靈敏度可達3個RFU(空斑形成單位)；在學中zui小檢出率為3個。
(3) 簡便、快速
PCR反應用耐高溫的Taq DNA聚合酶，一次性地將反應液加好后，即在DNA擴增液和水浴鍋上進行變性-退火-延伸反應，一般在2～4 小時完成擴增反應。擴增產(chǎn)物一般用電泳分析，不一定要用同位素，無放射性污染、易推廣。
(4) 對標本的純度要求低
不需要分離病毒或及培養(yǎng)細胞，DNA 粗制品及總RNA均可作為擴增模板?？芍苯佑门R床標本如血液、體腔液、洗嗽液、毛發(fā)、細胞、活PCR技術(shù)概論。
Thioperamide 10mg JWH 018 6-methoxyindole analog 10000mg
1-Palmitoyl-2-Linoleoyl-3-Stearoyl-rac-glycerol 5mg TACSTD2 Human, sf9 25mg
CREG1 Mouse 10mg MCL1 Human 25mg
HCV Core 16.8kDa 1mg OPG Fc Human 250mg
CM-579 hydrochloride 50mg RARA Human 5mg
Boc-Ser(Bzl)-ONp 1mg VIP sulfoxide (human, mouse, rat) 10mg
TRXR E.Coli 20μg Nutlin-3 50mg
CANX Human 350g (+/-)-ADX 71743 1mg
Palmitoyl Tripeptide-38 (acetate) 25g β-Casomorphin (1-4) (bovine) 2μg
TAN 420C 10mM(in1mLDMSO) Alendronic acid 100mg
Fmoc-Cys(Acm)-OH 25g PSB 10 hydrochloride 25g
Imeglimin hydrochloride 5mg Erteberel (LY500307) 5mg
(±)-Hexanoylcarnitine chloride 100mg NS3694 25mg
2C-T (hydrochloride) 1mg N-Deacetylcolchicine 10mM(in1mLDMSO)
2-Thiothinone (hydrochloride) 5mg Senicapoc 1mg
廣州管圓線蟲(AC)熒光-PCR法Linifanib (Synonyms: ABT-869; AL-39324) Linifanib (ABT-869) 是一種高效、口服的 VEGFR 和 PDGFR 家族多靶點抑制劑，對 KDR、FLT1、PDGFRβ、FLT3 的 IC
陶扎色替;VX-680 (Tozasertib, MK-0457) Tozasertib (VX 680; MK-0457) 是 Aurora A/B/C 激酶抑制劑，Ki 值分別為 0.6，18，4.6 n
Momelotinib (CYT387) Momelotinib (CYT387) 是 ATP 競爭性的 JAK1/JAK2 抑制劑，IC50 值分別為 11 nM/18 nM，是對 JAK3 選擇性的
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Torkinib;PP242 Torkinib (PP 242) 是選擇性，ATP競爭型的 mTOR 抑制劑，IC50 為 8 nM。PP242 抑制 mTORC1 和 mTORC2 的 I
AP23464
Tivozanib;AV-951; KRN951 Tivozanib (AV-951; KRN951) 是有效，選擇性的 VEGFR 1/2/3 抑制劑，IC50 值分別為0.21，0.16，and 0.24
Roscovitine; Seliciclib Roscovitine (Seliciclib, CYC202) is a potent and selective CDK inhibitor for Cdc
Daclatasvir dihydrochloride (BMS-790052 dihydrochloride) Daclatasvir dihydrochloride (BMS-790052 dihydrochloride) 是HCV NS5A高度選擇性抑制劑，EC50為
SB705498 SB705498 is a TRPV1 antagonist for hTRPV1, antagonizes capsaicin, acid, and heat
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