使用方法:
一、樣品 RNA 的制備
1、用自選方法抽提病毒樣品 RNA。注意：可以選用本公司生產(chǎn)的一管式病毒 RNAout
2、或柱式病毒 RNAout。
二：RT（逆轉(zhuǎn)錄）反應(yīng)合成 cDNA
1. 按下表配制 RT 反應(yīng)體系（20 μL 體系）
2. 70℃保溫 5 分鐘變性模板后立即冰浴。
3. 嚴格按順序加入 6μL RT Buffer（含 dNTP）和 2μL MMLV 逆轉(zhuǎn)錄酶（含 RI），
反應(yīng)終體積為 20μL。
4. 42℃保溫 60 分鐘。此步為 RT 反應(yīng)。
5. 70℃保溫 10 分鐘以終止反應(yīng)，然后放置在冰上待用。合成的 cDNA 可以直接作為 PCR 模板使用，丌需要純化。
訂購信息：
產(chǎn)品名稱：副溶血性弧菌(VP)熒光-PCR法
英文名稱：詳見說明
貨號：BJ-01R4963
產(chǎn)品規(guī)格：48T/盒
運輸：低溫
保存：負20度
有效期：一年
貨期：現(xiàn)貨
【儲存條件及有效期】:
-20℃避光保存，避免反復凍融，有效期6個月。
【適用儀器】:
ABI7300、ABI7500、LightCycler 480、iCycleriQ5、CFX96、SLAN等熒光定量PCR儀。
【樣本采集、存放及運輸】：
u 樣本采集：各類型樣本按照常規(guī)方法采集；
u 存放：樣本在2~8℃條件下保存應(yīng)不超過72h，-70℃以下可長期保存，但應(yīng)避免反復凍融（多凍融3次）；
u 運輸：采用**或泡沫箱加冰密封進行運輸。
本公司產(chǎn)品僅用于科研。
【自備試劑】:
核酸提取試劑，如QIAGEN QIAamp Viral RNA Mini試劑盒，也可選擇其他合適的核酸提取產(chǎn)品。
組成及試劑配制:
1、 酶標板：一塊（96孔）
2、 標準品（凍干品）： 2瓶，請臨用前15分鐘內(nèi)配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml，蓋好后室溫靜置大約10分鐘，同時反復顛倒/搓動以助溶解，其濃度為200 U/L，然后做系列倍比稀釋（注：不要直接在板中進行倍比稀釋），分別配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標準品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述標準品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中，混勻即可，其余濃度以此類推。
3、 樣品稀釋液：1×20ml。
4、 檢測稀釋液A：1×10ml。
5、 檢測稀釋液B：1×10ml。
實驗注意事項：
1）RT-PCR可以檢測組織、細胞、血液、等很多材料，不同的樣本有不同要求，實驗前請充分溝通確認實驗方案和樣本情況；
2）客戶盡可能提供實驗的背景信息、物種、基因準確的名稱和ID號；
3）客戶盡量不要提供DNA或RNA樣品。
4）樣本保存于液氮或干冰，也可以保存于Trizol液中。
實時熒光定量PCR（quantitative real-time PCR，qPCR）是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團，利用熒光信號積累實時監(jiān)測整個PCR進程，通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法。實時熒光定量PCR的化學原理包括探針類和非探針類兩類，探針類是利用與靶細胞序列特異性雜交的探針來指示擴增產(chǎn)物的增加，非探針類是利用熒光染料或者特異性設(shè)計的引物來指示擴增的增加。運用該技術(shù)可以對DNA、RNA樣品進行定量（包括量和相對定量）和定性分析。
主要服務(wù)：DNA或RNA的定量分析、基因表達差異分析、基因分型。
主要技術(shù)：引物設(shè)計、RNA提取、cDNA合成、qPCR。
PCR反應(yīng)的特異性決定因素為：
①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合；
②堿基配對原則；
③Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實性；
④靶基因的特異性與保守性。
其中引物與模板的正確結(jié)合是關(guān)鍵。引物與模板的結(jié)合及引物鏈的延伸是遵循堿基配對原則的。聚合酶合成反應(yīng)的忠實性及Taq DNA聚合酶耐高溫性，使反應(yīng)中模板與引物的結(jié)合(復性)可以在較高的溫度下進行，結(jié)合的特異性大大增加，被擴增的靶基因片段也就能保持很高的正確度。再通過選擇特異性和保守性高的靶基因區(qū)，其特異性程度就更高。
(2) 靈敏度高
PCR產(chǎn)物的**量是以指數(shù)方式增加的，能將皮克(pg=10-12g)量級的起始待測模板擴增到微克(ug=10-6g)水平。能從100萬個細胞中檢出一個靶細胞；在病毒的檢測中，PCR的靈敏度可達3個RFU(空斑形成單位)；在學中zui小檢出率為3個。
(3) 簡便、快速
PCR反應(yīng)用耐高溫的Taq DNA聚合酶，一次性地將反應(yīng)液加好后，即在DNA擴增液和水浴鍋上進行變性-退火-延伸反應(yīng)，一般在2～4 小時完成擴增反應(yīng)。擴增產(chǎn)物一般用電泳分析，不一定要用同位素，無放射性污染、易推廣。
(4) 對標本的純度要求低
不需要分離病毒或及培養(yǎng)細胞，DNA 粗制品及總RNA均可作為擴增模板。可直接用臨床標本如血液、體腔液、洗嗽液、毛發(fā)、細胞、活PCR技術(shù)概論。
E3 Ligase Ligand-Linker Conjugates 1 20μg Anti-inflammatory agent 2 5mg
α-Synuclein (61-95) (human) 0.5mg Resistomycin 100μg
H-Arg-Asn-Ile-Ala-Glu-Ile-Ile-Lys-Asp-Ile-OH 50mg CCT196969 2μg
Liproxstatin-1 5g CYC065 5mg
Zoniporide (hydrochloride) 10mg 6-Acetamidohexanoic acid (Acexamic Acid) 1mg
HDMC 1mg GULP1 Human 25mg
Quetiapine Fumarate 10mg HIV-2 Envelope 10mM*1mLinDMSO
Tos-Gly-Pro-OH 1mg Rhodiosin 5mg
Borrelia BmpA 100mg 1,2,3-Tripalmitoleoyl-rac-glycerol 25mg
Aminaftone (Aminaftone) 100IU ICAM1 Human, Sf9 500mg
UK 59811 hydrochloride 2μg Dimethyl DL-Glutamate (hydrochloride) 1mg
DNase Human 1g SNX1 Human 10μg
HSPA1B Human 5g Fosphenytoin disodium 1g
GPT2 Mouse 50mg PSN632408 5g
Thioredoxin reductase peptide TFA 10mg H-DL-Nle-OMe . HCl 5g
副溶血性弧菌(VP)熒光-PCR法Belnacasan(VX-765) Belnacasan (VX-765) 是 VRT-043198 的口服生物活性前藥，VRT-043198 是有效選擇性的 IL 轉(zhuǎn)換酶 (ICE)/caspa
Walrycin B Walrycin B是新型**素，能特異地靶向WalR應(yīng)答調(diào)節(jié)子。
WAY100635 WAY-100635 maleate 是一種有效且具有選擇性的 5-hydroxytryptamine 1A (5-HT1A) 受體拮抗劑，其 IC50 值為
WHI-P154 WHI-P154 是一種有效的 EGFR 抑制劑，同時可適度的抑制 JAK3 的活性，IC50 值分別為 4 nM 和 1.8 μM。
Wnt-c59 Wnt-C59 (C59)是高效可口服的 PORCN 抑制劑，IC50 為 74 pM。
WYE125132(WYE-132) WYE-132 (WYE-125132) 是一種高度有效的 ATP 競爭性和特異性 mTOR 激酶抑制劑 (IC50 為 0.19±0.07 nM)。WYE-1
XCT790 XCT-790 是 ERRα 的有效選擇性反向激動劑，IC50 值為 0.37 μM。XCT-790 在化療過程中誘導癌細胞死亡。XCT-790 對 ERRγ
XL388 XL388 是一種高效的 ATP 競爭性 mTOR 抑制劑，IC50 為 9.9 nM。XL388 同時抑制 mTORC1 和 mTORC2。
XMD17-109 XMD17-109 是一種特異性的 ERK-5 抑制劑，IC50 值為 162 nM。
YH239-EE YH239-EE是YH239的乙酯形式，是p53-MDM2的拮抗劑、凋亡誘導劑。
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