PCR反應(yīng)的特異性決定因素為：

①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合；

②堿基配對原則；

③Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實性；

④靶基因的特異性與保守性。

其中引物與模板的正確結(jié)合是關(guān)鍵。引物與模板的結(jié)合及引物鏈的延伸是遵循堿基配對原則的。聚合酶合成反應(yīng)的忠實性及Taq DNA聚合酶耐高溫性，使反應(yīng)中模板與引物的結(jié)合(復(fù)性)可以在較高的溫度下進行，結(jié)合的特異性大大增加，被擴增的靶基因片段也就能保持很高的正確度。再通過選擇特異性和保守性高的靶基因區(qū)，其特異性程度就更高。

(2) 靈敏度高

PCR產(chǎn)物的**量是以指數(shù)方式增加的，能將皮克(pg=10-12g)量級的起始待測模板擴增到微克(ug=10-6g)水平。能從100萬個細胞中檢出一個靶細胞；在病毒的檢測中，PCR的靈敏度可達3個RFU(空斑形成單位)；在學(xué)中zui小檢出率為3個。

(3) 簡便、快速

PCR反應(yīng)用耐高溫的Taq DNA聚合酶，一次性地將反應(yīng)液加好后，即在DNA擴增液和水浴鍋上進行變性-退火-延伸反應(yīng)，一般在2～4 小時完成擴增反應(yīng)。擴增產(chǎn)物一般用電泳分析，不一定要用同位素，無放射性污染、易推廣。

(4) 對標本的純度要求低

不需要分離病毒或及培養(yǎng)細胞，DNA 粗制品及總RNA均可作為擴增模板。可直接用臨床標本如血液、體腔液、洗嗽液、毛發(fā)、細胞、活PCR技術(shù)概論。

訂購信息：

產(chǎn)品名稱：鼠疫桿菌（YP-PLA/CA/A）熒光-PCR法

英文名稱：詳見說明
貨號：BJ-01R4959

產(chǎn)品規(guī)格：48T/盒

運輸：低溫

保存：負20度

有效期：一年

貨期：現(xiàn)貨

【儲存條件及有效期】:

-20℃避光保存，避免反復(fù)凍融，有效期6個月。

【適用儀器】:

ABI7300、ABI7500、LightCycler 480、iCycleriQ5、CFX96、SLAN等熒光定量PCR儀。

【樣本采集、存放及運輸】：

u 樣本采集：各類型樣本按照常規(guī)方法采集；

u 存放：樣本在2~8℃條件下保存應(yīng)不超過72h，-70℃以下可長期保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融（多凍融3次）；

u 運輸：采用**或泡沫箱加冰密封進行運輸。

本公司產(chǎn)品僅用于科研。

【自備試劑】:

核酸提取試劑，如QIAGEN QIAamp Viral RNA Mini試劑盒，也可選擇其他合適的核酸提取產(chǎn)品。

組成及試劑配制:

1、 酶標板：一塊（96孔）

2、 標準品（凍干品）： 2瓶，請臨用前15分鐘內(nèi)配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml，蓋好后室溫靜置大約10分鐘，同時反復(fù)顛倒/搓動以助溶解，其濃度為200 U/L，然后做系列倍比稀釋（注：不要直接在板中進行倍比稀釋），分別配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標準品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述標準品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中，混勻即可，其余濃度以此類推。

3、 樣品稀釋液：1×20ml。

4、 檢測稀釋液A：1×10ml。

5、 檢測稀釋液B：1×10ml。

使用方法:

一、樣品 RNA 的制備

1、用自選方法抽提病毒樣品 RNA。注意：可以選用本公司生產(chǎn)的一管式病毒 RNAout

2、或柱式病毒 RNAout。

二：RT（逆轉(zhuǎn)錄）反應(yīng)合成 cDNA

1. 按下表配制 RT 反應(yīng)體系（20 μL 體系）

2. 70℃保溫 5 分鐘變性模板后立即冰浴。

3. 嚴格按順序加入 6μL RT Buffer（含 dNTP）和 2μL MMLV 逆轉(zhuǎn)錄酶（含 RI），

反應(yīng)終體積為 20μL。

4. 42℃保溫 60 分鐘。此步為 RT 反應(yīng)。

5. 70℃保溫 10 分鐘以終止反應(yīng)，然后放置在冰上待用。合成的 cDNA 可以直接作為 PCR 模板使用，丌需要純化。

實驗注意事項：

1）RT-PCR可以檢測組織、細胞、血液、等很多材料，不同的樣本有不同要求，實驗前請充分溝通確認實驗方案和樣本情況；

2）客戶盡可能提供實驗的背景信息、物種、基因準確的名稱和ID號；

3）客戶盡量不要提供DNA或RNA樣品。

4）樣本保存于液氮或干冰，也可以保存于Trizol液中。

實時熒光定量PCR（quantitative real-time PCR，qPCR）是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團，利用熒光信號積累實時監(jiān)測整個PCR進程，通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法。實時熒光定量PCR的化學(xué)原理包括探針類和非探針類兩類，探針類是利用與靶細胞序列特異性雜交的探針來指示擴增產(chǎn)物的增加，非探針類是利用熒光染料或者特異性設(shè)計的引物來指示擴增的增加。運用該技術(shù)可以對DNA、RNA樣品進行定量（包括量和相對定量）和定性分析。

主要服務(wù)：DNA或RNA的定量分析、基因表達差異分析、基因分型。

主要技術(shù)：引物設(shè)計、RNA提取、cDNA合成、qPCR。

Econazole nitrate  5g  LCN2 Human  5g    

Diquafosol tetrasodium (INS365)  50mg  Cefodizime  1mg    

Prostaglandin F2α 1,15-lactone  5mg  H-4-Cyano-Phe-OH  50mg    

Bz-Orn-OH  5μg  Keap1-Nrf2-IN-1  100μg    

Vinflunine  50mg  1,2-Didecanoyl-3-Stearoyl-rac-glycerol  1mg    

Ro 46-2005  5mg  DDD85646  5mg    

Mangafodipir trisodium  1mg  Ziprasidone D8  50mg    

PI3kδ inhibitor 1  25g  N,N-Dimethylphenethylamine (hydrochloride)  50g    

PCA 4248  5mg  SCGN Rat  10mg    

RS 102895 hydrochloride  5mg  NMDAR antagonist 1  1mg    

E3 ligase Ligand 3  250mg  MCL-1/BCL-2-IN-1  1mg    

Vitamin K1 2,3-epoxide  1mg  LGALS1 Human  1mg    

HSR6071  20μg  PQBP1 Human  50mg    

HCV LFA  10mg  A 331440 dihydrochloride  500μg    

4-Methyl-benzhydrylamine resin (200-400 mesh, 0.70-1.30 mmol/g) . HCl  5mg  RHOQ Human  10μg    

鼠疫桿菌（YP-PLA/CA/A）熒光-PCR法PLX7904  PLX7904 是有效的，選擇性的 BRAF 抑制劑，在表達突變體 RAS 的細胞中，對 BRAFV600E 的 IC50 值約為 5 nM。

ACP196;acalabrutinib  Acalabrutinib 是一種新穎的，有效的，選擇性的 BTK 抑制劑，IC50 和 EC50 分別為 3 nM 和 8 nM。

Ap26113; brigatinib  Brigatinib 是有效，選擇性的 ALK 抑制劑，IC50 值為 0.6 nM。

EAI-045;EAI045  EAI045是突變體 EGFR 的第四代變構(gòu)抑制劑，在10 μM ATP時抑制EGFR，EGFRL858R，EGFRT790M 和 EGFRL858R/T790

Olmutinib (Synonyms: HM61713, BI 1482694)  Olmutinib (HM61713; BI-1482694) 是口服生物利用，不可逆的第三代 EGFR 酪氨酸激酶抑制劑，其與激酶結(jié)構(gòu)域附近的半胱氨酸殘基結(jié)合

Cladribine  N/A

Mivebresib (Synonyms: ABBV-075)  Mivebresib是一種有效且可口服的溴結(jié)構(gòu)域和末端結(jié)構(gòu)域 (BET) 抑制劑。 Mivebresib與 BRD4結(jié)合的 Ki 為1.5 nM。

Madrasin (DDD00107587)  Madrasin (DDD00107587) 是一種剪接抑制劑，可在體外阻止剪接中間體和產(chǎn)物的形成，并干擾剪接體組裝途徑中的一個或多個早期步驟。Madrasin

MK-571;MK571  MK-571是一種具有口服活性的、選擇性半胱氨酰白三烯受體CysLT1的拮抗劑。

(E)-SIS3  (E)-SIS3 是一種特異的、細胞可滲透性的、選擇性的 Smad3 抑制劑，抑制 Smad3 磷酸化的 IC50 值為 3 μM。(E)-SIS3 還通過 T

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