PCR反應的特異性決定因素為:
①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合;
②堿基配對原則;
③Taq DNA聚合酶合成反應的忠實性;
④靶基因的特異性與保守性。
其中引物與模板的正確結(jié)合是關(guān)鍵。引物與模板的結(jié)合及引物鏈的延伸是遵循堿基配對原則的。聚合酶合成反應的忠實性及Taq DNA聚合酶耐高溫性,使反應中模板與引物的結(jié)合(復性)可以在較高的溫度下進行,結(jié)合的特異性大大增加,被擴增的靶基因片段也就能保持很高的正確度。再通過選擇特異性和保守性高的靶基因區(qū),其特異性程度就更高。
(2) 靈敏度高
PCR產(chǎn)物的**量是以指數(shù)方式增加的,能將皮克(pg=10-12g)量級的起始待測模板擴增到微克(ug=10-6g)水平。能從100萬個細胞中檢出一個靶細胞;在病毒的檢測中,PCR的靈敏度可達3個RFU(空斑形成單位);在學中zui小檢出率為3個。
(3) 簡便、快速
PCR反應用耐高溫的Taq DNA聚合酶,一次性地將反應液加好后,即在DNA擴增液和水浴鍋上進行變性-退火-延伸反應,一般在2~4 小時完成擴增反應。擴增產(chǎn)物一般用電泳分析,不一定要用同位素,無放射性污染、易推廣。
(4) 對標本的純度要求低
不需要分離病毒或及培養(yǎng)細胞,DNA 粗制品及總RNA均可作為擴增模板。可直接用臨床標本如血液、體腔液、洗嗽液、毛發(fā)、細胞、活PCR技術(shù)概論。
訂購信息:
產(chǎn)品名稱:甲型流感病毒H亞型(IAV-H)熒光定量PCR試劑
英文名稱:詳見說明
貨號:BJ-01R4841
產(chǎn)品規(guī)格:48T/盒
運輸:低溫
保存:負20度
有效期:一年
貨期:現(xiàn)貨
【儲存條件及有效期】:
-20℃避光保存,避免反復凍融,有效期6個月。
【適用儀器】:
ABI7300、ABI7500、LightCycler 480、iCycleriQ5、CFX96、SLAN等熒光定量PCR儀。
【樣本采集、存放及運輸】:
u 樣本采集:各類型樣本按照常規(guī)方法采集;
u 存放:樣本在2~8℃條件下保存應不超過72h,-70℃以下可長期保存,但應避免反復凍融(多凍融3次);
u 運輸:采用**或泡沫箱加冰密封進行運輸。
本公司產(chǎn)品僅用于科研。
【自備試劑】:
核酸提取試劑,如QIAGEN QIAamp Viral RNA Mini試劑盒,也可選擇其他合適的核酸提取產(chǎn)品。
組成及試劑配制:
1、 酶標板:一塊(96孔)
2、 標準品(凍干品): 2瓶,請臨用前15分鐘內(nèi)配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml,蓋好后室溫靜置大約10分鐘,同時反復顛倒/搓動以助溶解,其濃度為200 U/L,然后做系列倍比稀釋(注:不要直接在板中進行倍比稀釋),分別配制成200 U/L,100 U/L,50 U/L,25 U/L,12.5 U/L,6.25 U/L,3.12 U/L,樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標準品:取0.3ml (不要少于0.3ml )200 U/L的上述標準品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中,混勻即可,其余濃度以此類推。
3、 樣品稀釋液:1×20ml。
4、 檢測稀釋液A:1×10ml。
5、 檢測稀釋液B:1×10ml。
使用方法:
一、樣品 RNA 的制備
1、用自選方法抽提病毒樣品 RNA。注意:可以選用本公司生產(chǎn)的一管式病毒 RNAout
2、或柱式病毒 RNAout。
二:RT(逆轉(zhuǎn)錄)反應合成 cDNA
1. 按下表配制 RT 反應體系(20 μL 體系)
2. 70℃保溫 5 分鐘變性模板后立即冰浴。
3. 嚴格按順序加入 6μL RT Buffer(含 dNTP)和 2μL MMLV 逆轉(zhuǎn)錄酶(含 RI),
反應終體積為 20μL。
4. 42℃保溫 60 分鐘。此步為 RT 反應。
5. 70℃保溫 10 分鐘以終止反應,然后放置在冰上待用。合成的 cDNA 可以直接作為 PCR 模板使用,丌需要純化。
實驗注意事項:
1)RT-PCR可以檢測組織、細胞、血液、等很多材料,不同的樣本有不同要求,實驗前請充分溝通確認實驗方案和樣本情況;
2)客戶盡可能提供實驗的背景信息、物種、基因準確的名稱和ID號;
3)客戶盡量不要提供DNA或RNA樣品。
4)樣本保存于液氮或干冰,也可以保存于Trizol液中。
實時熒光定量PCR(quantitative real-time PCR,qPCR)是指在PCR反應體系中加入熒光基團,利用熒光信號積累實時監(jiān)測整個PCR進程,通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法。實時熒光定量PCR的化學原理包括探針類和非探針類兩類,探針類是利用與靶細胞序列特異性雜交的探針來指示擴增產(chǎn)物的增加,非探針類是利用熒光染料或者特異性設計的引物來指示擴增的增加。運用該技術(shù)可以對DNA、RNA樣品進行定量(包括量和相對定量)和定性分析。
主要服務:DNA或RNA的定量分析、基因表達差異分析、基因分型。
主要技術(shù):引物設計、RNA提取、cDNA合成、qPCR。
H-Met-Ala-OH 25mg H-Aib-OBzl . HCl 5mg
FGF 2 Bovine (Bovine Pituitary) 5μg EGF Receptor Substrate 2 Phospho-Tyr5 50μg
PEN (rat) 5g ML367 5mg
ICA 069673 50mg EO 1428 1g
Noradrenaline bitartrate 10mg XMD17-109 10mg
Acivicin 25mg PIH1D2 Human 50mg
Pyrrophenone 5mg Yoda1 250mg
Docosahexaenoyl Serotonin 100mg Arginase inhibitor 1 10mM*1mLinDMSO
Toll-Like Receptor 7 Ligand II 10mg MTSEA 100mg
Verucerfont 50μg ML355 25mg
Telmisartan Acyl-β-D-Glucuronide 20μg LY303511 (hydrochloride) 1mg
Tridecanoic Acid methyl ester 25mg 3-hexanoyl-NBD Cholesterol 2mg
L-755,507 10mM(in1mLDMSO) H-p-Carboxy-Phe-OH 2μg
α-Linolenic Acid-d5 MaxSpec? Standard 5g TRPV antagonist 1 5mg
4-Thiouridine 250mg HO-1-IN-1 hydrochloride 5mg
甲型流感病毒H亞型(IAV-H)熒光定量PCR試劑Pentostatin; CI-825; Deoxycoformycin Pentostatin (CI-825; Deoxycoformycin) 是一種高效,不可逆的腺苷脫氨酶抑制劑,Ki 值為 2.5 pM。
MC-Val-Cit-PAB MC-Val-Cit-PAB是可被組織蛋白酶切割的ADC連接橋,用于制備抗體-**偶聯(lián)物。 美國FDA批準的**,如brentuximab vedotin使用了
HPPH (Synonyms: Photochlor) HPPH (Photochlor) 是**代光敏劑,用于光動力療法 (PDT)。
leniolisib(CDZ 173) Leniolisib (CDZ173)是高效,選擇性的 PI3Kδ 抑制劑,目前正在臨床II/III試驗中****缺陷類**。
MK677
WST-8 WST-8 是一種水溶性的四唑染料,相對于常規(guī)MTS檢測,WTS-8測定法的靈敏度增強。
Branebrutinib (Synonyms: BMS-986195) Branebrutinib (BMS-986195) 是一個強有效的、布魯頓氏酪氨酸激酶 (BTK) 的不可逆共價、選擇抑制劑,其 IC50 值 0.1 nM。
N-[3-[[5-Fluoro-2-[[4-[(2-methoxyethoxy)methoxy]phenyl]amino]-4-pyrimidinyl]amino]phenyl]-2-propenamide
Pyridoclax Pyridoclax 是一種 Mcl-1 抑制劑。
8-Methoxy-N,N-dipropyl-1,2,3,4-tetrahydro-2-naphthalenamine
- 溫馨提示:為規(guī)避購買風險,建議您在購買前務必確認供應商資質(zhì)與產(chǎn)品質(zhì)量。
- 免責申明:以上內(nèi)容為注冊會員自行發(fā)布,若信息的真實性、合法性存在爭議,平臺將會監(jiān)督協(xié)助處理,歡迎舉報