使用方法:
一、樣品 RNA 的制備
1、用自選方法抽提病毒樣品 RNA。注意：可以選用本公司生產(chǎn)的一管式病毒 RNAout
2、或柱式病毒 RNAout。
二：RT（逆轉(zhuǎn)錄）反應(yīng)合成 cDNA
1. 按下表配制 RT 反應(yīng)體系（20 μL 體系）
2. 70℃保溫 5 分鐘變性模板后立即冰浴。
3. 嚴格按順序加入 6μL RT Buffer（含 dNTP）和 2μL MMLV 逆轉(zhuǎn)錄酶（含 RI），
反應(yīng)終體積為 20μL。
4. 42℃保溫 60 分鐘。此步為 RT 反應(yīng)。
5. 70℃保溫 10 分鐘以終止反應(yīng)，然后放置在冰上待用。合成的 cDNA 可以直接作為 PCR 模板使用，丌需要純化。
訂購信息：
產(chǎn)品名稱：志賀氏菌熒光PCR方法
英文名稱：詳見說明
貨號：BJ-01R4775
產(chǎn)品規(guī)格：50T
運輸：低溫
保存：負20度
有效期：一年
貨期：現(xiàn)貨
【儲存條件及有效期】:
-20℃避光保存，避免反復(fù)凍融，有效期6個月。
【適用儀器】:
ABI7300、ABI7500、LightCycler 480、iCycleriQ5、CFX96、SLAN等熒光定量PCR儀。
【樣本采集、存放及運輸】：
u 樣本采集：各類型樣本按照常規(guī)方法采集；
u 存放：樣本在2~8℃條件下保存應(yīng)不超過72h，-70℃以下可長期保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融（多凍融3次）；
u 運輸：采用**或泡沫箱加冰密封進行運輸。
本公司產(chǎn)品僅用于科研。
【自備試劑】:
核酸提取試劑，如QIAGEN QIAamp Viral RNA Mini試劑盒，也可選擇其他合適的核酸提取產(chǎn)品。
組成及試劑配制:
1、 酶標板：一塊（96孔）
2、 標準品（凍干品）： 2瓶，請臨用前15分鐘內(nèi)配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml，蓋好后室溫靜置大約10分鐘，同時反復(fù)顛倒/搓動以助溶解，其濃度為200 U/L，然后做系列倍比稀釋（注：不要直接在板中進行倍比稀釋），分別配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標準品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述標準品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中，混勻即可，其余濃度以此類推。
3、 樣品稀釋液：1×20ml。
4、 檢測稀釋液A：1×10ml。
5、 檢測稀釋液B：1×10ml。
實驗注意事項：
1）RT-PCR可以檢測組織、細胞、血液、等很多材料，不同的樣本有不同要求，實驗前請充分溝通確認實驗方案和樣本情況；
2）客戶盡可能提供實驗的背景信息、物種、基因準確的名稱和ID號；
3）客戶盡量不要提供DNA或RNA樣品。
4）樣本保存于液氮或干冰，也可以保存于Trizol液中。
實時熒光定量PCR（quantitative real-time PCR，qPCR）是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團，利用熒光信號積累實時監(jiān)測整個PCR進程，通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法。實時熒光定量PCR的化學原理包括探針類和非探針類兩類，探針類是利用與靶細胞序列特異性雜交的探針來指示擴增產(chǎn)物的增加，非探針類是利用熒光染料或者特異性設(shè)計的引物來指示擴增的增加。運用該技術(shù)可以對DNA、RNA樣品進行定量（包括量和相對定量）和定性分析。
主要服務(wù)：DNA或RNA的定量分析、基因表達差異分析、基因分型。
主要技術(shù)：引物設(shè)計、RNA提取、cDNA合成、qPCR。
PCR反應(yīng)的特異性決定因素為：
①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合；
②堿基配對原則；
③Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實性；
④靶基因的特異性與保守性。
其中引物與模板的正確結(jié)合是關(guān)鍵。引物與模板的結(jié)合及引物鏈的延伸是遵循堿基配對原則的。聚合酶合成反應(yīng)的忠實性及Taq DNA聚合酶耐高溫性，使反應(yīng)中模板與引物的結(jié)合(復(fù)性)可以在較高的溫度下進行，結(jié)合的特異性大大增加，被擴增的靶基因片段也就能保持很高的正確度。再通過選擇特異性和保守性高的靶基因區(qū)，其特異性程度就更高。
(2) 靈敏度高
PCR產(chǎn)物的**量是以指數(shù)方式增加的，能將皮克(pg=10-12g)量級的起始待測模板擴增到微克(ug=10-6g)水平。能從100萬個細胞中檢出一個靶細胞；在病毒的檢測中，PCR的靈敏度可達3個RFU(空斑形成單位)；在學中zui小檢出率為3個。
(3) 簡便、快速
PCR反應(yīng)用耐高溫的Taq DNA聚合酶，一次性地將反應(yīng)液加好后，即在DNA擴增液和水浴鍋上進行變性-退火-延伸反應(yīng)，一般在2～4 小時完成擴增反應(yīng)。擴增產(chǎn)物一般用電泳分析，不一定要用同位素，無放射性污染、易推廣。
(4) 對標本的純度要求低
不需要分離病毒或及培養(yǎng)細胞，DNA 粗制品及總RNA均可作為擴增模板?？芍苯佑门R床標本如血液、體腔液、洗嗽液、毛發(fā)、細胞、活PCR技術(shù)概論。
CK1-IN-1 1mg Fmoc-D-Val-OH 500μg
HLA-DRA Human 100μg Descarbamylnovobiocin 20mg
4’-hydroxy Chalcone 5μg H3K27(Me) (15-34) 100mg
Fmoc-Gly-OSu 10mM(in1mLDMSO) Toltrazuril sulfone 5mg
SCH 546738 50mg Motilin (human, porcine) 1mg
6-trans-12-epi Leukotriene B4 50mg KDdiA-PC 500mg
MK-0812 500mg Eniporide hydrochloride 5mg
McN-A 343 5g Methylmalonyl Coenzyme A 10mM*1mLinWater
Toddalolactone 10mg H-Lys-Gln-Ala-Gly-Asp-Val-OH 5mg
Groenlandicine 1g Ximelagatran 10mg
TSSC4 Human 1mg Lonafarnib 10mg
H-Gly-Pro-4MβNA 20μg NDRG3 Human 1mg
LOM612 500mg Lentinan 50mg
H-D-Gln(Trt)-OH 10mg Fmoc-Tyr(2-bromo-Z)-OH 5μg
SB 225002 10mg LSN2463359 5mg
志賀氏菌熒光PCR方法BIX02565 BIX 02565 是一種有效的核糖體 S6 激酶 2 (RSK2) 抑制劑，IC50 為 1.1 nM。
CF-101;Piclidenoson Piclidenoson (IB-MECA; CF-101) 是一種 腺苷 A3 受體 (adenosine A3 receptor) 激動劑, EC50 值為
CPI-0610 CPI-0610 是一種有效的，選擇性的，具有細胞活性的 BET 抑制劑，抑制 BRD4-BD1 的 IC50 值為 39 nM。CPI-0610 對 MYC
GW0742 GW0742 是一種有效的 PPARβ 和 PPARδ 激動劑，在蛋白質(zhì)結(jié)合實驗中，對人 PPARδ 的 IC50 值為 1 nM；同時對人 PPARδ，PPA
JD-5037 JD-5037是CB1R有效拮抗劑，IC50 值為 1.5 nM。
LTI-291 Gcase activator 1 是葡糖腦苷脂酶 (Gcase) 的激活劑來自** WO 2017192841 A1。
MK8931;Verubecestat(MK-8931) Verubecestat (MK-8931) 是 β-分泌酶1 (BACE1) 抑制劑，研究用于**阿爾茨海默病。
PI-1840 PI-1840是蛋白酶體chymotrypsin-like (CT-L)高效選擇性性抑制劑，IC50值為27nM。
PNU74654 PNU-74654是Wnt/β-catenin通路的的抑制劑，在NCI-H295 細胞中的IC50值為129.8 μM。
RAD-140 RAD140是有效的，口服生物有效的非甾體選擇性雄**受體調(diào)節(jié)劑 (SARM)。
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