使用方法:
一、樣品 RNA 的制備
1、用自選方法抽提病毒樣品 RNA。注意：可以選用本公司生產(chǎn)的一管式病毒 RNAout
2、或柱式病毒 RNAout。
二：RT（逆轉(zhuǎn)錄）反應(yīng)合成 cDNA
1. 按下表配制 RT 反應(yīng)體系（20 μL 體系）
2. 70℃保溫 5 分鐘變性模板后立即冰浴。
3. 嚴(yán)格按順序加入 6μL RT Buffer（含 dNTP）和 2μL MMLV 逆轉(zhuǎn)錄酶（含 RI），
反應(yīng)終體積為 20μL。
4. 42℃保溫 60 分鐘。此步為 RT 反應(yīng)。
5. 70℃保溫 10 分鐘以終止反應(yīng)，然后放置在冰上待用。合成的 cDNA 可以直接作為 PCR 模板使用，丌需要純化。
訂購信息：
產(chǎn)品名稱：新星諾卡菌PCR實(shí)驗(yàn)試劑
英文名稱：Nocardia novaPCR
貨號：BJ-01R3957
產(chǎn)品規(guī)格：50T
運(yùn)輸：低溫
保存：負(fù)20度
有效期：一年
貨期：現(xiàn)貨
【儲存條件及有效期】:
-20℃避光保存，避免反復(fù)凍融，有效期6個月。
【適用儀器】:
ABI7300、ABI7500、LightCycler 480、iCycleriQ5、CFX96、SLAN等熒光定量PCR儀。
【樣本采集、存放及運(yùn)輸】：
u 樣本采集：各類型樣本按照常規(guī)方法采集；
u 存放：樣本在2~8℃條件下保存應(yīng)不超過72h，-70℃以下可長期保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融（多凍融3次）；
u 運(yùn)輸：采用**或泡沫箱加冰密封進(jìn)行運(yùn)輸。
本公司產(chǎn)品僅用于科研。
【自備試劑】:
核酸提取試劑，如QIAGEN QIAamp Viral RNA Mini試劑盒，也可選擇其他合適的核酸提取產(chǎn)品。
組成及試劑配制:
1、 酶標(biāo)板：一塊（96孔）
2、 標(biāo)準(zhǔn)品（凍干品）： 2瓶，請臨用前15分鐘內(nèi)配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml，蓋好后室溫靜置大約10分鐘，同時反復(fù)顛倒/搓動以助溶解，其濃度為200 U/L，然后做系列倍比稀釋（注：不要直接在板中進(jìn)行倍比稀釋），分別配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標(biāo)準(zhǔn)品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述標(biāo)準(zhǔn)品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中，混勻即可，其余濃度以此類推。
3、 樣品稀釋液：1×20ml。
4、 檢測稀釋液A：1×10ml。
5、 檢測稀釋液B：1×10ml。
實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)：
1）RT-PCR可以檢測組織、細(xì)胞、血液、等很多材料，不同的樣本有不同要求，實(shí)驗(yàn)前請充分溝通確認(rèn)實(shí)驗(yàn)方案和樣本情況；
2）客戶盡可能提供實(shí)驗(yàn)的背景信息、物種、基因準(zhǔn)確的名稱和ID號；
3）客戶盡量不要提供DNA或RNA樣品。
4）樣本保存于液氮或干冰，也可以保存于Trizol液中。
實(shí)時熒光定量PCR（quantitative real-time PCR，qPCR）是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán)，利用熒光信號積累實(shí)時監(jiān)測整個PCR進(jìn)程，通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對未知模板進(jìn)行定量分析的方法。實(shí)時熒光定量PCR的化學(xué)原理包括探針類和非探針類兩類，探針類是利用與靶細(xì)胞序列特異性雜交的探針來指示擴(kuò)增產(chǎn)物的增加，非探針類是利用熒光染料或者特異性設(shè)計(jì)的引物來指示擴(kuò)增的增加。運(yùn)用該技術(shù)可以對DNA、RNA樣品進(jìn)行定量（包括量和相對定量）和定性分析。
主要服務(wù)：DNA或RNA的定量分析、基因表達(dá)差異分析、基因分型。
主要技術(shù)：引物設(shè)計(jì)、RNA提取、cDNA合成、qPCR。
PCR反應(yīng)的特異性決定因素為：
①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合；
②堿基配對原則；
③Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性；
④靶基因的特異性與保守性。
其中引物與模板的正確結(jié)合是關(guān)鍵。引物與模板的結(jié)合及引物鏈的延伸是遵循堿基配對原則的。聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性及Taq DNA聚合酶耐高溫性，使反應(yīng)中模板與引物的結(jié)合(復(fù)性)可以在較高的溫度下進(jìn)行，結(jié)合的特異性大大增加，被擴(kuò)增的靶基因片段也就能保持很高的正確度。再通過選擇特異性和保守性高的靶基因區(qū)，其特異性程度就更高。
(2) 靈敏度高
PCR產(chǎn)物的**量是以指數(shù)方式增加的，能將皮克(pg=10-12g)量級的起始待測模板擴(kuò)增到微克(ug=10-6g)水平。能從100萬個細(xì)胞中檢出一個靶細(xì)胞；在病毒的檢測中，PCR的靈敏度可達(dá)3個RFU(空斑形成單位)；在學(xué)中zui小檢出率為3個。
(3) 簡便、快速
PCR反應(yīng)用耐高溫的Taq DNA聚合酶，一次性地將反應(yīng)液加好后，即在DNA擴(kuò)增液和水浴鍋上進(jìn)行變性-退火-延伸反應(yīng)，一般在2～4 小時完成擴(kuò)增反應(yīng)。擴(kuò)增產(chǎn)物一般用電泳分析，不一定要用同位素，無放射性污染、易推廣。
(4) 對標(biāo)本的純度要求低
不需要分離病毒或及培養(yǎng)細(xì)胞，DNA 粗制品及總RNA均可作為擴(kuò)增模板?？芍苯佑门R床標(biāo)本如血液、體腔液、洗嗽液、毛發(fā)、細(xì)胞、活PCR技術(shù)概論。
EMG1 Human 100g Ezetimibe Hydroxy Glucuronide 10mg
LXS196 25μg Dengue NS1, ST1 1mg
NOL3 Human 10mg Genistein 8-c-glucoside 20μg
HMP Linker 1mg Org41841 1mg
Anabasine ((S)-Anabasine) 100mg Econazole nitrate 10mg
Tandutinib (MLN518) 100mg Fezolinetant (ESN-364) 5mg
NS19504 50mg Chitinase-IN-2 hydrochloride 50mg
Topilutamide (BP766) 10mg Idarubicin HCl 5mg
CB-1954 1mg Adavivint (SM04690) 5mg
Doxorubicinol (hydrochloride) 1mg Methyl-L-NIO (hydrochloride) 5mg
Vitexin 4’-glucoside 10μg Mangafodipir trisodium 50mg
EML 425 2μg Phosphodiesterase 4 Inhibitor 10mg
1-Methyladenosine 10mM(in1mLH2O) Balipodect 1mg
Z-2-Nal-OH 1g Boc-His(Tos)-ol 25mg
XL-784 free base 25mg Ald-Ph-amido-PEG2 100mg
新星諾卡菌PCR實(shí)驗(yàn)試劑醉椒素 英文名稱Kavain 含量：≥99% 20mg/支 LRRC4 腦瘤相關(guān)基因抗體規(guī)格: 0.2ml
千金藤啶堿 英文名稱L-Stepholidine 含量：≥98% 20mg/支 LRRK2 富亮氨酸重復(fù)激酶2抗體規(guī)格: 0.2ml
1,5-二咖啡酰奎寧酸 英文名稱1,5-Dicaffeoylquinic acid 含量：≥98% 20mg/支 LTA4H 白三烯A4水解酶抗體規(guī)格: 0.1ml
1,8-二羥基葸醌 英文名稱1,8-Dihydroxyanthraquinone 含量：≥98.0% 20mg/支 LTB4-R1/BLTR 白三烯B4受體1抗體規(guī)格: 0.1ml
10-姜酚 英文名稱10-Gingerol 含量：≥95% 20mg/支 LTB4-R2 白三烯B4受體2抗體規(guī)格: 0.1ml
10-羥基喜樹堿 英文名稱10-Hydroxy camptothecin 含量：≥95% 20mg/支 Iumbrokinase 蚓激酶抗體規(guī)格: 0.1ml
10-脫乙酰基巴卡?、?英文名稱10-Deacetylbaccatine III 含量：≥98% 20mg/支 Lxn/Latexin 羧肽酶抑制劑抗體規(guī)格: 0.1ml
11-氧-羅漢果皂甙V 英文名稱11-oxo-mogroside V 含量：≥98% 20mg/支 LXR alpha 肝臟X受體抗體規(guī)格: 0.1ml
13-乙酰基-9-羥基巴卡丁III 英文名稱13-Acetyl-9-Dihydrobaccatin-III 含量：≥98% 20mg/支 Ly-6G/Gr-1 細(xì)胞抗原6G抗體規(guī)格: 0.2ml
- 溫馨提示：為規(guī)避購買風(fēng)險(xiǎn)，建議您在購買前務(wù)必確認(rèn)供應(yīng)商資質(zhì)與產(chǎn)品質(zhì)量。
- 免責(zé)申明：以上內(nèi)容為注冊會員自行發(fā)布，若信息的真實(shí)性、合法性存在爭議，平臺將會監(jiān)督協(xié)助處理，歡迎舉報(bào)