訂購信息:
產(chǎn)品名稱:麻風分枝桿菌PCR實驗試劑
英文名稱:Mycobacterium lepraePCR
貨號:BJ-01R3897
產(chǎn)品規(guī)格:50T
運輸:低溫
保存:負20度
有效期:一年
貨期:現(xiàn)貨
【儲存條件及有效期】:
-20℃避光保存,避免反復凍融,有效期6個月。
【適用儀器】:
ABI7300、ABI7500、LightCycler 480、iCycleriQ5、CFX96、SLAN等熒光定量PCR儀。
【樣本采集、存放及運輸】:
u 樣本采集:各類型樣本按照常規(guī)方法采集;
u 存放:樣本在2~8℃條件下保存應不超過72h,-70℃以下可長期保存,但應避免反復凍融(多凍融3次);
u 運輸:采用**或泡沫箱加冰密封進行運輸。
本公司產(chǎn)品僅用于科研。
【自備試劑】:
核酸提取試劑,如QIAGEN QIAamp Viral RNA Mini試劑盒,也可選擇其他合適的核酸提取產(chǎn)品。
組成及試劑配制:
1、 酶標板:一塊(96孔)
2、 標準品(凍干品): 2瓶,請臨用前15分鐘內(nèi)配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml,蓋好后室溫靜置大約10分鐘,同時反復顛倒/搓動以助溶解,其濃度為200 U/L,然后做系列倍比稀釋(注:不要直接在板中進行倍比稀釋),分別配制成200 U/L,100 U/L,50 U/L,25 U/L,12.5 U/L,6.25 U/L,3.12 U/L,樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標準品:取0.3ml (不要少于0.3ml )200 U/L的上述標準品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中,混勻即可,其余濃度以此類推。
3、 樣品稀釋液:1×20ml。
4、 檢測稀釋液A:1×10ml。
5、 檢測稀釋液B:1×10ml。
使用方法:
一、樣品 RNA 的制備
1、用自選方法抽提病毒樣品 RNA。注意:可以選用本公司生產(chǎn)的一管式病毒 RNAout
2、或柱式病毒 RNAout。
二:RT(逆轉錄)反應合成 cDNA
1. 按下表配制 RT 反應體系(20 μL 體系)
2. 70℃保溫 5 分鐘變性模板后立即冰浴。
3. 嚴格按順序加入 6μL RT Buffer(含 dNTP)和 2μL MMLV 逆轉錄酶(含 RI),
反應終體積為 20μL。
4. 42℃保溫 60 分鐘。此步為 RT 反應。
5. 70℃保溫 10 分鐘以終止反應,然后放置在冰上待用。合成的 cDNA 可以直接作為 PCR 模板使用,丌需要純化。
實驗注意事項:
1)RT-PCR可以檢測組織、細胞、血液、等很多材料,不同的樣本有不同要求,實驗前請充分溝通確認實驗方案和樣本情況;
2)客戶盡可能提供實驗的背景信息、物種、基因準確的名稱和ID號;
3)客戶盡量不要提供DNA或RNA樣品。
4)樣本保存于液氮或干冰,也可以保存于Trizol液中。
實時熒光定量PCR(quantitative real-time PCR,qPCR)是指在PCR反應體系中加入熒光基團,利用熒光信號積累實時監(jiān)測整個PCR進程,通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法。實時熒光定量PCR的化學原理包括探針類和非探針類兩類,探針類是利用與靶細胞序列特異性雜交的探針來指示擴增產(chǎn)物的增加,非探針類是利用熒光染料或者特異性設計的引物來指示擴增的增加。運用該技術可以對DNA、RNA樣品進行定量(包括量和相對定量)和定性分析。
主要服務:DNA或RNA的定量分析、基因表達差異分析、基因分型。
主要技術:引物設計、RNA提取、cDNA合成、qPCR。
E3 Ligase Ligand-Linker Conjugates 19 50ug PC945 100mg CDK2AP1 Human 1500mg
CFTR corrector 2 50mg Piboserod hydrochloride 5g FGTI-2734 mesylate 10mM*1mLinDMSO
Dimenhydrinate 1mg INCB054329 250μg BMP 2 Human, Monomer 100μg
6α-hydroxy Paclitaxel 25μg VX-984 (M9831) 10mg HEXIM1 Human 1mg
Itacitinib 5mg Ac-Trp-ONp 5mg Flt3 Ligand Human, Sf9 5mg
4-Abz-Gly-Pro-D-Leu-D-Ala-NHOH 25mg Bifendate 1mg LASP1 Human 1mg
Soyasaponin Aa 500mg H-Gly-Ala-Phe-OH 10mg Microcystin-LA 2mg
ACS 67 5g PAF-AN-1 5μg Hyaluronic acid 10mg
FH1 (NSC 12407) 5mg S/GSK1349572 5mg SR9011 hydrochloride 25mg
CCDC25 Human 5mg LIF Human, His 5mg Boc-HoTyr-OH 1μg
SAR407899 hydrochloride 5g RAB5C Human 5mg Noggin Human 50g
ACP-5862 10g p85a Bovine 10mg Mevastatin 50mg
Z-LEHD-FMK 1mg Dengue Envelope-4 45kDa 5mg
FTH1 Human 50IU CLMP Human 5mg
Adenosine 5’-phosphosulfate (sodium salt) 5mg ZLN024 hydrochloride 500μg
麻風分枝桿菌PCR實驗試劑鮭降鈣素 英文名稱鑒別,有關物質檢查 含量:140734-200501 20mg/支 HIV-1 ENV(gp160) 艾滋病病毒-1包膜糖蛋白抗體規(guī)格: 0.1ml
5'-胞苷酸 英文名稱檢查 含量:140735-200501 20mg/支 HIV-1 ENV (gp160) 艾滋病病毒-1包膜糖蛋白抗體規(guī)格: 0.1ml
4'-羥基 英文名稱鑒別及含量測定 含量:140736-200501 20mg/支 HLA Class 1 ABC/HLAabc 人類白細胞抗原A抗體規(guī)格: 0.1ml
5'-羥基吲哚乙酸 英文名稱HPLC法含量測定 含量:140737-200501 20mg/支 MHC class I 組織相容性復合體1多肽抗體規(guī)格: 0.1ml
馬尿酸 英文名稱HPLC法含量測定 含量:140738-200501 20mg/支 MHC Class II/MRC OX-6 組織相容性復合體2抗體規(guī)格: 0.1ml
苯乙酰谷氨酰胺 英文名稱HPLC法含量測定 含量:140739-200501 20mg/支 HLA DMβ 組織相容性復合體β抗體規(guī)格: 0.1ml
氧化型谷胱甘肽 英文名稱檢查 含量:140746-200801 20mg/支 HLA-DR HLA-DR抗體規(guī)格: 0.2ml
門冬酰胺 英文名稱鑒別 含量:140747-201001 20mg/支 HLA B/HLA G 人類白細胞抗原G抗體規(guī)格: 0.1ml
門冬氨酸鳥氨酸 英文名稱HPLC法含量測定 含量:140749-200701 20mg/支 HLA E 人類白細胞抗原E抗體規(guī)格: 0.2ml
PCR反應的特異性決定因素為:
①引物與模板DNA特異正確的結合;
②堿基配對原則;
③Taq DNA聚合酶合成反應的忠實性;
④靶基因的特異性與保守性。
其中引物與模板的正確結合是關鍵。引物與模板的結合及引物鏈的延伸是遵循堿基配對原則的。聚合酶合成反應的忠實性及Taq DNA聚合酶耐高溫性,使反應中模板與引物的結合(復性)可以在較高的溫度下進行,結合的特異性大大增加,被擴增的靶基因片段也就能保持很高的正確度。再通過選擇特異性和保守性高的靶基因區(qū),其特異性程度就更高。
(2) 靈敏度高
PCR產(chǎn)物的**量是以指數(shù)方式增加的,能將皮克(pg=10-12g)量級的起始待測模板擴增到微克(ug=10-6g)水平。能從100萬個細胞中檢出一個靶細胞;在病毒的檢測中,PCR的靈敏度可達3個RFU(空斑形成單位);在學中zui小檢出率為3個。
(3) 簡便、快速
PCR反應用耐高溫的Taq DNA聚合酶,一次性地將反應液加好后,即在DNA擴增液和水浴鍋上進行變性-退火-延伸反應,一般在2~4 小時完成擴增反應。擴增產(chǎn)物一般用電泳分析,不一定要用同位素,無放射性污染、易推廣。
(4) 對標本的純度要求低
不需要分離病毒或及培養(yǎng)細胞,DNA 粗制品及總RNA均可作為擴增模板??芍苯佑门R床標本如血液、體腔液、洗嗽液、毛發(fā)、細胞、活PCR技術概論。
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