使用方法:
一、樣品 RNA 的制備
1、用自選方法抽提病毒樣品 RNA。注意：可以選用本公司生產(chǎn)的一管式病毒 RNAout
2、或柱式病毒 RNAout。
二：RT（逆轉(zhuǎn)錄）反應(yīng)合成 cDNA
1. 按下表配制 RT 反應(yīng)體系（20 μL 體系）
2. 70℃保溫 5 分鐘變性模板后立即冰浴。
3. 嚴(yán)格按順序加入 6μL RT Buffer（含 dNTP）和 2μL MMLV 逆轉(zhuǎn)錄酶（含 RI），
反應(yīng)終體積為 20μL。
4. 42℃保溫 60 分鐘。此步為 RT 反應(yīng)。
5. 70℃保溫 10 分鐘以終止反應(yīng)，然后放置在冰上待用。合成的 cDNA 可以直接作為 PCR 模板使用，丌需要純化。
訂購信息：
產(chǎn)品名稱：擠奶工結(jié)節(jié)病毒熒光-PCR法
英文名稱：Milker's Nodule Virus(MNV)PCR
貨號：BJ-01R3863
產(chǎn)品規(guī)格：50T
運輸：低溫
保存：負(fù)20度
有效期：一年
貨期：現(xiàn)貨
【儲存條件及有效期】:
-20℃避光保存，避免反復(fù)凍融，有效期6個月。
【適用儀器】:
ABI7300、ABI7500、LightCycler 480、iCycleriQ5、CFX96、SLAN等熒光定量PCR儀。
【樣本采集、存放及運輸】：
u 樣本采集：各類型樣本按照常規(guī)方法采集；
u 存放：樣本在2~8℃條件下保存應(yīng)不超過72h，-70℃以下可長期保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融（多凍融3次）；
u 運輸：采用**或泡沫箱加冰密封進行運輸。
本公司產(chǎn)品僅用于科研。
【自備試劑】:
核酸提取試劑，如QIAGEN QIAamp Viral RNA Mini試劑盒，也可選擇其他合適的核酸提取產(chǎn)品。
組成及試劑配制:
1、 酶標(biāo)板：一塊（96孔）
2、 標(biāo)準(zhǔn)品（凍干品）： 2瓶，請臨用前15分鐘內(nèi)配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml，蓋好后室溫靜置大約10分鐘，同時反復(fù)顛倒/搓動以助溶解，其濃度為200 U/L，然后做系列倍比稀釋（注：不要直接在板中進行倍比稀釋），分別配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標(biāo)準(zhǔn)品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述標(biāo)準(zhǔn)品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中，混勻即可，其余濃度以此類推。
3、 樣品稀釋液：1×20ml。
4、 檢測稀釋液A：1×10ml。
5、 檢測稀釋液B：1×10ml。
實驗注意事項：
1）RT-PCR可以檢測組織、細胞、血液、等很多材料，不同的樣本有不同要求，實驗前請充分溝通確認(rèn)實驗方案和樣本情況；
2）客戶盡可能提供實驗的背景信息、物種、基因準(zhǔn)確的名稱和ID號；
3）客戶盡量不要提供DNA或RNA樣品。
4）樣本保存于液氮或干冰，也可以保存于Trizol液中。
實時熒光定量PCR（quantitative real-time PCR，qPCR）是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團，利用熒光信號積累實時監(jiān)測整個PCR進程，通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對未知模板進行定量分析的方法。實時熒光定量PCR的化學(xué)原理包括探針類和非探針類兩類，探針類是利用與靶細胞序列特異性雜交的探針來指示擴增產(chǎn)物的增加，非探針類是利用熒光染料或者特異性設(shè)計的引物來指示擴增的增加。運用該技術(shù)可以對DNA、RNA樣品進行定量（包括量和相對定量）和定性分析。
主要服務(wù)：DNA或RNA的定量分析、基因表達差異分析、基因分型。
主要技術(shù)：引物設(shè)計、RNA提取、cDNA合成、qPCR。
PCR反應(yīng)的特異性決定因素為：
①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合；
②堿基配對原則；
③Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實性；
④靶基因的特異性與保守性。
其中引物與模板的正確結(jié)合是關(guān)鍵。引物與模板的結(jié)合及引物鏈的延伸是遵循堿基配對原則的。聚合酶合成反應(yīng)的忠實性及Taq DNA聚合酶耐高溫性，使反應(yīng)中模板與引物的結(jié)合(復(fù)性)可以在較高的溫度下進行，結(jié)合的特異性大大增加，被擴增的靶基因片段也就能保持很高的正確度。再通過選擇特異性和保守性高的靶基因區(qū)，其特異性程度就更高。
(2) 靈敏度高
PCR產(chǎn)物的**量是以指數(shù)方式增加的，能將皮克(pg=10-12g)量級的起始待測模板擴增到微克(ug=10-6g)水平。能從100萬個細胞中檢出一個靶細胞；在病毒的檢測中，PCR的靈敏度可達3個RFU(空斑形成單位)；在學(xué)中zui小檢出率為3個。
(3) 簡便、快速
PCR反應(yīng)用耐高溫的Taq DNA聚合酶，一次性地將反應(yīng)液加好后，即在DNA擴增液和水浴鍋上進行變性-退火-延伸反應(yīng)，一般在2～4 小時完成擴增反應(yīng)。擴增產(chǎn)物一般用電泳分析，不一定要用同位素，無放射性污染、易推廣。
(4) 對標(biāo)本的純度要求低
不需要分離病毒或及培養(yǎng)細胞，DNA 粗制品及總RNA均可作為擴增模板?？芍苯佑门R床標(biāo)本如血液、體腔液、洗嗽液、毛發(fā)、細胞、活PCR技術(shù)概論。
MK-5172 hydrate 25mg COR 170 5mg Amsacrine 25mg
ABX464 25g Gibberellic acid 10mg Z-N-Me-Ile-OH 25g
PSI-7977 1g SH3GLB1 Human 50mg Isobavachalcone 5mg
EPZ020411 5mg CD34 Human, GST 5mg FST Human, Sf9 5mg
FKBP1A Mouse 2μg H-Phg-OtBu . HCl 100μg Misonidazole 100mg
5'-deoxy Thymidine 5mg Fmoc-Glutaminol 50μg S119-8 10μg
ADX88178 500mg PFI-2 (hydrochloride) 100μg Streptozocin 25g
4-methoxy MiPT (hydrochloride) 10mM*1mLinDMSO FABP6 Human 10mg PP 1 1g
DUSP19 Human 50mg Sophoraflavanone G 100mg BET-BAY 002 25g
β-Melanocyte Stimulating Hormone (MSH), human TFA (Beta-MSH (1-22) (human) (TFA)) 10mg Ac2-12 25mg CpdA 1500mg
PGAM1 Mouse 5mg H-Glu-Thr-Tyr-OH 1mg Suc-Ile-Glu(γ-pip)-Gly-Arg-pNA (hydrochloride) 1g
Arg-Gly-Glu-Ser(TFA) 1mg VU 29 50mg Z-DL-Trp-OH 1mg
Tolfenpyrad 1mg GW4869 10mg H-2,6-Difluoro-Phe-OH . HCl 10mg
N-terminally acetylated Leu-enkephalin 20μg (R)-Apremilast 25mg Acetyl-Hirudin (55-65) (desulfated) 500mg
Amidepsine D 50μg (±)12(13)-EpOME 1mg Fenoldopam hydrochloride 10mM*1mLinDMSO
擠奶工結(jié)節(jié)病毒熒光-PCR法二甲基亞砜 英文名稱供殘留溶劑檢查用 含量：130106-200901 20mg/支 l-Myc Myc基因肺癌相關(guān)蛋白抗體規(guī)格: 0.1ml
環(huán)己烷 英文名稱供殘留溶劑檢查用 含量：130113-200901 20mg/支 Frizzled 5 Wnt信號受體蛋白抗體規(guī)格: 0.2ml
氯霉素 英文名稱效價測定 含量：130303-200614 20mg/支 Ghrelin/Obestatin 腦腸肽抗體規(guī)格: 0.1ml
土霉素 英文名稱效價測定 含量：130305-200720 20mg/支 AARE 氧化蛋白質(zhì)水解酶規(guī)格: 0.2ml
四環(huán)素 英文名稱效價測定 含量：130306-200918 20mg/支 ABI2 腫瘤抑制基因ABI2/精氨酸酪氨酸蛋白激酶結(jié)合蛋白抗體規(guī)格: 0.2ml
紅霉素 英文名稱效價測定 含量：130307-200716 20mg/支 GHRF/GHRH 生長 釋放 抗體規(guī)格: 0.1ml
鏈霉素 英文名稱效價測定 含量：130308-200713 20mg/支 ID1 DNA結(jié)合抑制因子1抗體規(guī)格: 0.1ml
新霉素 英文名稱效價測定 含量：130309-200811 20mg/支 GIG8/ID2 DNA結(jié)合抑制因子2抗體規(guī)格: 0.1ml
多粘 素B 英文名稱效價測定 含量：130313- 20mg/支 ABI3 ABI基因家族2抗體規(guī)格: 0.2ml
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