PCR反應(yīng)的特異性決定因素為：

①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合；

②堿基配對原則；

③Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實性；

④靶基因的特異性與保守性。

其中引物與模板的正確結(jié)合是關(guān)鍵。引物與模板的結(jié)合及引物鏈的延伸是遵循堿基配對原則的。聚合酶合成反應(yīng)的忠實性及Taq DNA聚合酶耐高溫性，使反應(yīng)中模板與引物的結(jié)合(復(fù)性)可以在較高的溫度下進行，結(jié)合的特異性大大增加，被擴增的靶基因片段也就能保持很高的正確度。再通過選擇特異性和保守性高的靶基因區(qū)，其特異性程度就更高。

(2) 靈敏度高

PCR產(chǎn)物的**量是以指數(shù)方式增加的，能將皮克(pg=10-12g)量級的起始待測模板擴增到微克(ug=10-6g)水平。能從100萬個細(xì)胞中檢出一個靶細(xì)胞；在病毒的檢測中，PCR的靈敏度可達(dá)3個RFU(空斑形成單位)；在學(xué)中zui小檢出率為3個。

(3) 簡便、快速

PCR反應(yīng)用耐高溫的Taq DNA聚合酶，一次性地將反應(yīng)液加好后，即在DNA擴增液和水浴鍋上進行變性-退火-延伸反應(yīng)，一般在2～4 小時完成擴增反應(yīng)。擴增產(chǎn)物一般用電泳分析，不一定要用同位素，無放射性污染、易推廣。

(4) 對標(biāo)本的純度要求低

不需要分離病毒或及培養(yǎng)細(xì)胞，DNA 粗制品及總RNA均可作為擴增模板?？芍苯佑门R床標(biāo)本如血液、體腔液、洗嗽液、毛發(fā)、細(xì)胞、活PCR技術(shù)概論。

訂購信息：

產(chǎn)品名稱：納米小孢子菌熒光-PCR法

英文名稱：Microsporum nanumPCR
貨號：BJ-01R3859

產(chǎn)品規(guī)格：50T

運輸：低溫

保存：負(fù)20度

有效期：一年

貨期：現(xiàn)貨

【儲存條件及有效期】:

-20℃避光保存，避免反復(fù)凍融，有效期6個月。

【適用儀器】:

ABI7300、ABI7500、LightCycler 480、iCycleriQ5、CFX96、SLAN等熒光定量PCR儀。

【樣本采集、存放及運輸】：

u 樣本采集：各類型樣本按照常規(guī)方法采集；

u 存放：樣本在2~8℃條件下保存應(yīng)不超過72h，-70℃以下可長期保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融（多凍融3次）；

u 運輸：采用**或泡沫箱加冰密封進行運輸。

本公司產(chǎn)品僅用于科研。

【自備試劑】:

核酸提取試劑，如QIAGEN QIAamp Viral RNA Mini試劑盒，也可選擇其他合適的核酸提取產(chǎn)品。

組成及試劑配制:

1、 酶標(biāo)板：一塊（96孔）

2、 標(biāo)準(zhǔn)品（凍干品）： 2瓶，請臨用前15分鐘內(nèi)配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml，蓋好后室溫靜置大約10分鐘，同時反復(fù)顛倒/搓動以助溶解，其濃度為200 U/L，然后做系列倍比稀釋（注：不要直接在板中進行倍比稀釋），分別配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標(biāo)準(zhǔn)品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述標(biāo)準(zhǔn)品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中，混勻即可，其余濃度以此類推。

3、 樣品稀釋液：1×20ml。

4、 檢測稀釋液A：1×10ml。

5、 檢測稀釋液B：1×10ml。

使用方法:

一、樣品 RNA 的制備

1、用自選方法抽提病毒樣品 RNA。注意：可以選用本公司生產(chǎn)的一管式病毒 RNAout

2、或柱式病毒 RNAout。

二：RT（逆轉(zhuǎn)錄）反應(yīng)合成 cDNA

1. 按下表配制 RT 反應(yīng)體系（20 μL 體系）

2. 70℃保溫 5 分鐘變性模板后立即冰浴。

3. 嚴(yán)格按順序加入 6μL RT Buffer（含 dNTP）和 2μL MMLV 逆轉(zhuǎn)錄酶（含 RI），

反應(yīng)終體積為 20μL。

4. 42℃保溫 60 分鐘。此步為 RT 反應(yīng)。

5. 70℃保溫 10 分鐘以終止反應(yīng)，然后放置在冰上待用。合成的 cDNA 可以直接作為 PCR 模板使用，丌需要純化。

實驗注意事項：

1）RT-PCR可以檢測組織、細(xì)胞、血液、等很多材料，不同的樣本有不同要求，實驗前請充分溝通確認(rèn)實驗方案和樣本情況；

2）客戶盡可能提供實驗的背景信息、物種、基因準(zhǔn)確的名稱和ID號；

3）客戶盡量不要提供DNA或RNA樣品。

4）樣本保存于液氮或干冰，也可以保存于Trizol液中。

實時熒光定量PCR（quantitative real-time PCR，qPCR）是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團，利用熒光信號積累實時監(jiān)測整個PCR進程，通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對未知模板進行定量分析的方法。實時熒光定量PCR的化學(xué)原理包括探針類和非探針類兩類，探針類是利用與靶細(xì)胞序列特異性雜交的探針來指示擴增產(chǎn)物的增加，非探針類是利用熒光染料或者特異性設(shè)計的引物來指示擴增的增加。運用該技術(shù)可以對DNA、RNA樣品進行定量（包括量和相對定量）和定性分析。

主要服務(wù)：DNA或RNA的定量分析、基因表達(dá)差異分析、基因分型。

主要技術(shù)：引物設(shè)計、RNA提取、cDNA合成、qPCR。

5-IAI (hydrochloride)  10mg  Ciliobrevin D  10mg  3-Deaza-2’-deoxyadenosine  5mg

ONC201  25mg  GK921  1mg  BMS-626529  5mg

Amyloid β-Protein (25-35) amide  25mg  HKI 357  10mM(in1mLDMSO)  Nelociguat (BAY60-4552)  5mg

Atuveciclib Racemate (BAY-1143572 Racemate)  25g  T 98475  25mg  Guacetisal  1mg

Z-Ile-Pro-OH  10mg  HB-EGF Human, His   50mg  2-Methylsuccinic acid  50mg

15(R)-15-methyl Prostaglandin F2α methyl ester  1mg  IL 21 Mouse  50mg  Sulindac  50mg

GIBH-130  10μg  FSL-1  1mg  Monohydroxy Melphalan (hydrochloride)  1mg

AT13148  50mg  Ciwujianoside A1  20μg  H-Ser(SO?H)-OH  10μg

Resistin Mutant Human  250mg  VEGF Human  5μg  Z-Phe-Ala-OH  2μg

REN Human  100mg  ORC6 Human  10mg  3-CPs (3-Carbethoxypsoralen)  5mg

ILK-IN-2  50mg  MIP 3a Mouse  1mg  LY334370  10mg

PAL resin (200-400 mesh, 0.2-0.5 mmol/g)  50mg  STX4 Human  50mg  EGFR-IN-3  10mg

COX5B Human  1mg  Cyproconazole  5mg  Ginkgolide K  10mg

4-pentynoyl-Coenzyme A (trifluoroacetate salt)  1g  LH secretion antagonist 1  1mg  U 73343  10mg

EFNB2 Mouse  500mg  20-O-Acetylingenol-3-angelate (Euphorbia factor Pe1)  5mg  Verinurad  10mM*1mLinDMSO

納米小孢子菌熒光-PCR法合歡皮 英文名稱TLC法鑒別 含量：121549-200501 20mg/支 CXCL15/Lungkine  趨化因子CXCL15抗體規(guī)格: 0.2ml

草果 英文名稱TLC法鑒別 含量：121550-200501 20mg/支 GCK/Glucokinase  葡萄糖激酶抗體規(guī)格: 0.1ml

葛根（野葛） 英文名稱TLC法鑒別 含量：121551-200902 20mg/支 GCS/glucosylceramide synthase  谷氨酸半胱氨酸γ合成酶抗體規(guī)格: 0.1ml

地錦草（斑地錦） 英文名稱TLC法鑒別 含量：121552-200501 20mg/支 Plzf  早幼粒細(xì)胞白血病鋅指蛋白抗體規(guī)格: 0.2ml

黃精（制） 英文名稱TLC法鑒別 含量：121553- 20mg/支 CSF3/G-CSF  粒細(xì)胞-巨噬細(xì)胞集落刺激因子3抗體規(guī)格: 0.1ml

苦杏仁（東北杏） 英文名稱TLC法鑒別 含量：121554-200702 20mg/支 GDIA1  腫瘤轉(zhuǎn)移抑制基因GDIA1抗體規(guī)格: 0.1ml

茵陳（茵陳蒿） 英文名稱TLC法鑒別 含量：121555- 20mg/支 GDIA2/ARHGDIB  腫瘤轉(zhuǎn)移抑制基因GDIA2抗體規(guī)格: 0.1ml

橘葉 英文名稱TLC法鑒別 含量：121556-200701 20mg/支 G-CSFR/CD114  粒細(xì)胞-巨噬細(xì)胞集落刺激因子3受體抗體規(guī)格: 0.1ml

老鸛草 英文名稱TLC法鑒別 含量：121557-200801 20mg/支 GKRP  葡萄糖激酶調(diào)節(jié)蛋白抗體規(guī)格: 0.2ml

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