PCR反應的特異性決定因素為:
①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合;
②堿基配對原則;
③Taq DNA聚合酶合成反應的忠實性;
④靶基因的特異性與保守性。
其中引物與模板的正確結(jié)合是關(guān)鍵。引物與模板的結(jié)合及引物鏈的延伸是遵循堿基配對原則的。聚合酶合成反應的忠實性及Taq DNA聚合酶耐高溫性,使反應中模板與引物的結(jié)合(復性)可以在較高的溫度下進行,結(jié)合的特異性大大增加,被擴增的靶基因片段也就能保持很高的正確度。再通過選擇特異性和保守性高的靶基因區(qū),其特異性程度就更高。
(2) 靈敏度高
PCR產(chǎn)物的**量是以指數(shù)方式增加的,能將皮克(pg=10-12g)量級的起始待測模板擴增到微克(ug=10-6g)水平。能從100萬個細胞中檢出一個靶細胞;在病毒的檢測中,PCR的靈敏度可達3個RFU(空斑形成單位);在學中zui小檢出率為3個。
(3) 簡便、快速
PCR反應用耐高溫的Taq DNA聚合酶,一次性地將反應液加好后,即在DNA擴增液和水浴鍋上進行變性-退火-延伸反應,一般在2~4 小時完成擴增反應。擴增產(chǎn)物一般用電泳分析,不一定要用同位素,無放射性污染、易推廣。
(4) 對標本的純度要求低
不需要分離病毒或及培養(yǎng)細胞,DNA 粗制品及總RNA均可作為擴增模板??芍苯佑门R床標本如血液、體腔液、洗嗽液、毛發(fā)、細胞、活PCR技術(shù)概論。
訂購信息:
產(chǎn)品名稱:同豬嵴病毒梅拉哥病毒PCR實驗試劑
英文名稱:Menangle Virus()RTPCR
貨號:BJ-01R3853
產(chǎn)品規(guī)格:50T
運輸:低溫
保存:負20度
有效期:一年
貨期:現(xiàn)貨
【儲存條件及有效期】:
-20℃避光保存,避免反復凍融,有效期6個月。
【適用儀器】:
ABI7300、ABI7500、LightCycler 480、iCycleriQ5、CFX96、SLAN等熒光定量PCR儀。
【樣本采集、存放及運輸】:
u 樣本采集:各類型樣本按照常規(guī)方法采集;
u 存放:樣本在2~8℃條件下保存應不超過72h,-70℃以下可長期保存,但應避免反復凍融(多凍融3次);
u 運輸:采用**或泡沫箱加冰密封進行運輸。
本公司產(chǎn)品僅用于科研。
【自備試劑】:
核酸提取試劑,如QIAGEN QIAamp Viral RNA Mini試劑盒,也可選擇其他合適的核酸提取產(chǎn)品。
組成及試劑配制:
1、 酶標板:一塊(96孔)
2、 標準品(凍干品): 2瓶,請臨用前15分鐘內(nèi)配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml,蓋好后室溫靜置大約10分鐘,同時反復顛倒/搓動以助溶解,其濃度為200 U/L,然后做系列倍比稀釋(注:不要直接在板中進行倍比稀釋),分別配制成200 U/L,100 U/L,50 U/L,25 U/L,12.5 U/L,6.25 U/L,3.12 U/L,樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標準品:取0.3ml (不要少于0.3ml )200 U/L的上述標準品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中,混勻即可,其余濃度以此類推。
3、 樣品稀釋液:1×20ml。
4、 檢測稀釋液A:1×10ml。
5、 檢測稀釋液B:1×10ml。
使用方法:
一、樣品 RNA 的制備
1、用自選方法抽提病毒樣品 RNA。注意:可以選用本公司生產(chǎn)的一管式病毒 RNAout
2、或柱式病毒 RNAout。
二:RT(逆轉(zhuǎn)錄)反應合成 cDNA
1. 按下表配制 RT 反應體系(20 μL 體系)
2. 70℃保溫 5 分鐘變性模板后立即冰浴。
3. 嚴格按順序加入 6μL RT Buffer(含 dNTP)和 2μL MMLV 逆轉(zhuǎn)錄酶(含 RI),
反應終體積為 20μL。
4. 42℃保溫 60 分鐘。此步為 RT 反應。
5. 70℃保溫 10 分鐘以終止反應,然后放置在冰上待用。合成的 cDNA 可以直接作為 PCR 模板使用,丌需要純化。
實驗注意事項:
1)RT-PCR可以檢測組織、細胞、血液、等很多材料,不同的樣本有不同要求,實驗前請充分溝通確認實驗方案和樣本情況;
2)客戶盡可能提供實驗的背景信息、物種、基因準確的名稱和ID號;
3)客戶盡量不要提供DNA或RNA樣品。
4)樣本保存于液氮或干冰,也可以保存于Trizol液中。
實時熒光定量PCR(quantitative real-time PCR,qPCR)是指在PCR反應體系中加入熒光基團,利用熒光信號積累實時監(jiān)測整個PCR進程,通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法。實時熒光定量PCR的化學原理包括探針類和非探針類兩類,探針類是利用與靶細胞序列特異性雜交的探針來指示擴增產(chǎn)物的增加,非探針類是利用熒光染料或者特異性設(shè)計的引物來指示擴增的增加。運用該技術(shù)可以對DNA、RNA樣品進行定量(包括量和相對定量)和定性分析。
主要服務:DNA或RNA的定量分析、基因表達差異分析、基因分型。
主要技術(shù):引物設(shè)計、RNA提取、cDNA合成、qPCR。
AU-224 20μg RAB2B Human 1mg Z-Tyr-Val-Ala-Asp-AFC 1mg
Ac-Leu-NHMe 10mg KIN1400 10μg SNRPD1 Human 100μg
Disitertide (P144) 100mg GOT1 Mouse 5μg SDHAF2 Human 5μg
H-Thr(tBu)-allyl ester . HCl 500mg Fmoc-Pro-OH 25mg Dapagliflozin ((2S)-1,2-propanediol, hydrate) 2mg
3-AQC 50mg Z-Trp-Gly-OH 10mM(in1mLDMSO) Vabicaserin hydrochloride (SCA 136) 5mg
Desmethyl Erlotinib 5mg Macranthoidin A 1mg 3-Indolepropionic acid 5g
TAS-115 mesylate (TAS-115 methanesulfonate) 10mg Methicillin (sodium salt) 1g Bergamottin (5-Geranoxypsoralen) 10mM*1mLinDMSO
25E-NBOMe (hydrochloride) 1g Azelnidipine 100mg Telomerase-IN-1 10mg
PF-05089771 (tosylate) 10mg CAY10662 100mg Dihydrokavain (7,8-Dihydrokawain) 5mg
Gymnemagenin 500μg Temafloxacin (hydrochloride) 1mg Raltegravir (MK-0518) 1mg
KT 5823 2μg (+)-JQ1 PA 1mg PLAUR Human 50μg
Becatecarin 1g H-Lys(biotinyl)-NH2 25μg H-1152 10μg
PF-04449913 10mM*1mLinDMSO BMPR1A Human, CHO 100mg AU-224 25mg
NF 546 50mg HCV Core Genotype-2b 5mg DO264 25mg
IL 1 beta Mouse 10mM(in1mLDMSO) CBX5 Human 5mg Daunorubicin 10mg
同豬嵴病毒梅拉哥病毒PCR實驗試劑全葉青蘭 英文名稱TLC法鑒別 含量:121493-200501 20mg/支 Styk1 絲氨酸/蘇氨酸/酪氨酸激酶STYK1抗體規(guī)格: 0.2ml
龜甲(腹甲) 英文名稱TLC法鑒別 含量:121494-200401 20mg/支 GAD65 谷氨酸脫羧酶-65抗體(C端)規(guī)格: 0.1ml
山茱萸 英文名稱TLC法鑒別 含量:121495-200702 20mg/支 GADD34 生長抑制DNA損傷基因34抗體規(guī)格: 0.1ml
五指柑(黃荊) 英文名稱TLC法鑒別 含量:121496-200401 20mg/支 GADD45 生長抑制DNA損傷基因45抗體規(guī)格: 0.1ml
廣山楂葉 英文名稱TLC法鑒別 含量:121497-200401 20mg/支 GADD45B 生長抑制DNA損傷基因GADD45β抗體規(guī)格: 0.1ml
白蘞 英文名稱TLC法鑒別 含量:121498-200501 20mg/支 GADD153/CHOP/DDIT3 GADD153抗體規(guī)格: 0.1ml
南沙參(沙參) 英文名稱TLC法鑒別 含量:121499-200602 20mg/支 phospho-GADD153 (Ser30) 磷酸化GADD153抗體規(guī)格: 0.1ml
珍珠母(馬氏珍珠貝) 英文名稱TLC法鑒別 含量:121500-200501 20mg/支 AF 4 protein 原癌基因AF4蛋白抗體規(guī)格: 0.2ml
石斛(鐵皮石斛) 英文名稱TLC法鑒別 含量:121501- 20mg/支 Galanin 神經(jīng)節(jié)肽抗體規(guī)格: 0.2ml
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