PCR反應的特異性決定因素為:
①引物與模板DNA特異正確的結合;
②堿基配對原則;
③Taq DNA聚合酶合成反應的忠實性;
④靶基因的特異性與保守性。
其中引物與模板的正確結合是關鍵。引物與模板的結合及引物鏈的延伸是遵循堿基配對原則的。聚合酶合成反應的忠實性及Taq DNA聚合酶耐高溫性,使反應中模板與引物的結合(復性)可以在較高的溫度下進行,結合的特異性大大增加,被擴增的靶基因片段也就能保持很高的正確度。再通過選擇特異性和保守性高的靶基因區(qū),其特異性程度就更高。
(2) 靈敏度高
PCR產(chǎn)物的**量是以指數(shù)方式增加的,能將皮克(pg=10-12g)量級的起始待測模板擴增到微克(ug=10-6g)水平。能從100萬個細胞中檢出一個靶細胞;在病毒的檢測中,PCR的靈敏度可達3個RFU(空斑形成單位);在學中zui小檢出率為3個。
(3) 簡便、快速
PCR反應用耐高溫的Taq DNA聚合酶,一次性地將反應液加好后,即在DNA擴增液和水浴鍋上進行變性-退火-延伸反應,一般在2~4 小時完成擴增反應。擴增產(chǎn)物一般用電泳分析,不一定要用同位素,無放射性污染、易推廣。
(4) 對標本的純度要求低
不需要分離病毒或及培養(yǎng)細胞,DNA 粗制品及總RNA均可作為擴增模板。可直接用臨床標本如血液、體腔液、洗嗽液、毛發(fā)、細胞、活PCR技術概論。
訂購信息:
產(chǎn)品名稱:錦鯉皰疹病毒熒光-PCR法
英文名稱:Koi Herpesvirus(KHV)PCR
貨號:BJ-01R3795
產(chǎn)品規(guī)格:50T
運輸:低溫
保存:負20度
有效期:一年
貨期:現(xiàn)貨
【儲存條件及有效期】:
-20℃避光保存,避免反復凍融,有效期6個月。
【適用儀器】:
ABI7300、ABI7500、LightCycler 480、iCycleriQ5、CFX96、SLAN等熒光定量PCR儀。
【樣本采集、存放及運輸】:
u 樣本采集:各類型樣本按照常規(guī)方法采集;
u 存放:樣本在2~8℃條件下保存應不超過72h,-70℃以下可長期保存,但應避免反復凍融(多凍融3次);
u 運輸:采用**或泡沫箱加冰密封進行運輸。
本公司產(chǎn)品僅用于科研。
【自備試劑】:
核酸提取試劑,如QIAGEN QIAamp Viral RNA Mini試劑盒,也可選擇其他合適的核酸提取產(chǎn)品。
組成及試劑配制:
1、 酶標板:一塊(96孔)
2、 標準品(凍干品): 2瓶,請臨用前15分鐘內配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml,蓋好后室溫靜置大約10分鐘,同時反復顛倒/搓動以助溶解,其濃度為200 U/L,然后做系列倍比稀釋(注:不要直接在板中進行倍比稀釋),分別配制成200 U/L,100 U/L,50 U/L,25 U/L,12.5 U/L,6.25 U/L,3.12 U/L,樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標準品:取0.3ml (不要少于0.3ml )200 U/L的上述標準品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中,混勻即可,其余濃度以此類推。
3、 樣品稀釋液:1×20ml。
4、 檢測稀釋液A:1×10ml。
5、 檢測稀釋液B:1×10ml。
使用方法:
一、樣品 RNA 的制備
1、用自選方法抽提病毒樣品 RNA。注意:可以選用本公司生產(chǎn)的一管式病毒 RNAout
2、或柱式病毒 RNAout。
二:RT(逆轉錄)反應合成 cDNA
1. 按下表配制 RT 反應體系(20 μL 體系)
2. 70℃保溫 5 分鐘變性模板后立即冰浴。
3. 嚴格按順序加入 6μL RT Buffer(含 dNTP)和 2μL MMLV 逆轉錄酶(含 RI),
反應終體積為 20μL。
4. 42℃保溫 60 分鐘。此步為 RT 反應。
5. 70℃保溫 10 分鐘以終止反應,然后放置在冰上待用。合成的 cDNA 可以直接作為 PCR 模板使用,丌需要純化。
實驗注意事項:
1)RT-PCR可以檢測組織、細胞、血液、等很多材料,不同的樣本有不同要求,實驗前請充分溝通確認實驗方案和樣本情況;
2)客戶盡可能提供實驗的背景信息、物種、基因準確的名稱和ID號;
3)客戶盡量不要提供DNA或RNA樣品。
4)樣本保存于液氮或干冰,也可以保存于Trizol液中。
實時熒光定量PCR(quantitative real-time PCR,qPCR)是指在PCR反應體系中加入熒光基團,利用熒光信號積累實時監(jiān)測整個PCR進程,通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法。實時熒光定量PCR的化學原理包括探針類和非探針類兩類,探針類是利用與靶細胞序列特異性雜交的探針來指示擴增產(chǎn)物的增加,非探針類是利用熒光染料或者特異性設計的引物來指示擴增的增加。運用該技術可以對DNA、RNA樣品進行定量(包括量和相對定量)和定性分析。
主要服務:DNA或RNA的定量分析、基因表達差異分析、基因分型。
主要技術:引物設計、RNA提取、cDNA合成、qPCR。
Phosphatidylinositols (soy) (sodium salt) 25mg Sibiricaxanthone B 5mg Fmoc-Asp-NH2 5g
CMV Mosaic 1μg Boc-His(Boc)-OH 50mg Y.Enterocolitica (O:9) YopE 10mM(in1mLDMSO)
Mal-PEG2-NH2 5mg Chymostatin 1mg iFSP1 1g
(±)7(8)-EpDPA 25g Apelin-17 (human, bovine) 20μg Xipamide 10mg
Boc-4-oxo-Pro-OH 5mg Norovirus Group-2 1g CUDC-907 25mg
13,14-dihydro-15-keto Prostaglandin A2 5mg 7,8,9,10-Tetrahydrobenzo[a]pyren-7-ol 10mM(in1mLDMSO) MAO-IN-1 5mg
POBN 50mg Cav 2.2 blocker 1 10mg 4-Methylumbelliferyl β-D-Galactopyranoside-6-sulfate (sodium salt) 100μg
Piperacillin Sodium 250mg BI-3812 5mg Isocytosine 2μg
Sulfaphenazole 50mg SKF 38393 hydrobromide 5mg (-)-Sparteine sulfate pentahydrate 10mM*1mLinDMSO
KRAS 2A Human 100μg NNC 05-2090 hydrochloride 1g NDUFS6 Human 1mg
Hydrastinine hydrochloride 20μg Carbazole derivative 1 (2-Fluoro-7-[(3-pyridinyl)methyl]-9H-carbazole) 5mg CM-579 trihydrochloride 10mg
4’,?7-?Di-?O-?methylnaringenin 5mg Acenocoumarol 5mg Ac-LEVD-AFC 500mg
HOE 32020 10mg R162 1mg UBE2V2 Human 5mg
Lerociclib dihydrochloride (G1T38 dihydrochloride) 50mg MDL 105519 10μg CP 47,497-para-quinone analog 5mg
Oxolamine citrate (SKF-9976 citrate) 50mg Parathyroid Hormone (1-34), bovine 5g IDNK E.Coli 10mg
錦鯉皰疹病毒熒光-PCR法干蟾皮 英文名稱TLC法鑒別 含量:120963-200504 20mg/支 DAP-5/p97 死亡相關蛋白5抗體規(guī)格: 0.1ml
千里光 英文名稱TLC法鑒別 含量:120964-200707 20mg/支 DAPK1 凋亡相關蛋白激酶1抗體規(guī)格: 0.1ml
木芙蓉葉 英文名稱TLC法鑒別 含量:120965-200703 20mg/支 DAPK2 凋亡相關蛋白激酶2抗體規(guī)格: 0.1ml
仙鶴草 英文名稱TLC法鑒別 含量:120966-200505 20mg/支 DAPK3/ZIP Kinase 凋亡相關蛋白激酶3抗體規(guī)格: 0.1ml
沒藥(天然沒藥) 英文名稱TLC法鑒別 含量:120967-200903 20mg/支 DCBLD2 內皮細胞和平滑肌細胞衍生的神經(jīng)纖毛蛋白抗體規(guī)格: 0.2ml
陳皮 英文名稱TLC法鑒別 含量:120969-200808 20mg/支 ANKHD1 艾滋病病毒制約錨定蛋白抗體規(guī)格: 0.2ml
乳香 英文名稱TLC法鑒別 含量:120970-200904 20mg/支 Deltex-1 DTX1抗體規(guī)格: 0.2ml
南板藍根 英文名稱TLC法鑒別 含量:120971- 20mg/支 envelope glycoprotein (Dengue virus type-2) 登革熱病毒抗體規(guī)格: 0.2ml
浙貝母 英文名稱TLC法鑒別 含量:120972-200404 20mg/支 ASAP3 GTP酶激活蛋白ASAP3抗體規(guī)???: 0.2ml
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