使用方法:
一、樣品 RNA 的制備
1、用自選方法抽提病毒樣品 RNA。注意：可以選用本公司生產(chǎn)的一管式病毒 RNAout
2、或柱式病毒 RNAout。
二：RT（逆轉(zhuǎn)錄）反應(yīng)合成 cDNA
1. 按下表配制 RT 反應(yīng)體系（20 μL 體系）
2. 70℃保溫 5 分鐘變性模板后立即冰浴。
3. 嚴(yán)格按順序加入 6μL RT Buffer（含 dNTP）和 2μL MMLV 逆轉(zhuǎn)錄酶（含 RI），
反應(yīng)終體積為 20μL。
4. 42℃保溫 60 分鐘。此步為 RT 反應(yīng)。
5. 70℃保溫 10 分鐘以終止反應(yīng)，然后放置在冰上待用。合成的 cDNA 可以直接作為 PCR 模板使用，丌需要純化。
訂購信息：
產(chǎn)品名稱：鸚鵡喙羽病病毒熒光-PCR法
英文名稱：Beak and Feather Disease Virus PCR
貨號：BJ-01R3339
產(chǎn)品規(guī)格：50T
運(yùn)輸：低溫
保存：負(fù)20度
有效期：一年
貨期：現(xiàn)貨
【儲存條件及有效期】:
-20℃避光保存，避免反復(fù)凍融，有效期6個月。
【適用儀器】:
ABI7300、ABI7500、LightCycler 480、iCycleriQ5、CFX96、SLAN等熒光定量PCR儀。
【樣本采集、存放及運(yùn)輸】：
u 樣本采集：各類型樣本按照常規(guī)方法采集；
u 存放：樣本在2~8℃條件下保存應(yīng)不超過72h，-70℃以下可長期保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融（多凍融3次）；
u 運(yùn)輸：采用**或泡沫箱加冰密封進(jìn)行運(yùn)輸。
本公司產(chǎn)品僅用于科研。
【自備試劑】:
核酸提取試劑，如QIAGEN QIAamp Viral RNA Mini試劑盒，也可選擇其他合適的核酸提取產(chǎn)品。
組成及試劑配制:
1、 酶標(biāo)板：一塊（96孔）
2、 標(biāo)準(zhǔn)品（凍干品）： 2瓶，請臨用前15分鐘內(nèi)配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml，蓋好后室溫靜置大約10分鐘，同時反復(fù)顛倒/搓動以助溶解，其濃度為200 U/L，然后做系列倍比稀釋（注：不要直接在板中進(jìn)行倍比稀釋），分別配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標(biāo)準(zhǔn)品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述標(biāo)準(zhǔn)品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中，混勻即可，其余濃度以此類推。
3、 樣品稀釋液：1×20ml。
4、 檢測稀釋液A：1×10ml。
5、 檢測稀釋液B：1×10ml。
實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)：
1）RT-PCR可以檢測組織、細(xì)胞、血液、等很多材料，不同的樣本有不同要求，實(shí)驗(yàn)前請充分溝通確認(rèn)實(shí)驗(yàn)方案和樣本情況；
2）客戶盡可能提供實(shí)驗(yàn)的背景信息、物種、基因準(zhǔn)確的名稱和ID號；
3）客戶盡量不要提供DNA或RNA樣品。
4）樣本保存于液氮或干冰，也可以保存于Trizol液中。
實(shí)時熒光定量PCR（quantitative real-time PCR，qPCR）是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán)，利用熒光信號積累實(shí)時監(jiān)測整個PCR進(jìn)程，通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對未知模板進(jìn)行定量分析的方法。實(shí)時熒光定量PCR的化學(xué)原理包括探針類和非探針類兩類，探針類是利用與靶細(xì)胞序列特異性雜交的探針來指示擴(kuò)增產(chǎn)物的增加，非探針類是利用熒光染料或者特異性設(shè)計的引物來指示擴(kuò)增的增加。運(yùn)用該技術(shù)可以對DNA、RNA樣品進(jìn)行定量（包括量和相對定量）和定性分析。
主要服務(wù)：DNA或RNA的定量分析、基因表達(dá)差異分析、基因分型。
主要技術(shù)：引物設(shè)計、RNA提取、cDNA合成、qPCR。
PCR反應(yīng)的特異性決定因素為：
①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合；
②堿基配對原則；
③Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性；
④靶基因的特異性與保守性。
其中引物與模板的正確結(jié)合是關(guān)鍵。引物與模板的結(jié)合及引物鏈的延伸是遵循堿基配對原則的。聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性及Taq DNA聚合酶耐高溫性，使反應(yīng)中模板與引物的結(jié)合(復(fù)性)可以在較高的溫度下進(jìn)行，結(jié)合的特異性大大增加，被擴(kuò)增的靶基因片段也就能保持很高的正確度。再通過選擇特異性和保守性高的靶基因區(qū)，其特異性程度就更高。
(2) 靈敏度高
PCR產(chǎn)物的**量是以指數(shù)方式增加的，能將皮克(pg=10-12g)量級的起始待測模板擴(kuò)增到微克(ug=10-6g)水平。能從100萬個細(xì)胞中檢出一個靶細(xì)胞；在病毒的檢測中，PCR的靈敏度可達(dá)3個RFU(空斑形成單位)；在學(xué)中zui小檢出率為3個。
(3) 簡便、快速
PCR反應(yīng)用耐高溫的Taq DNA聚合酶，一次性地將反應(yīng)液加好后，即在DNA擴(kuò)增液和水浴鍋上進(jìn)行變性-退火-延伸反應(yīng)，一般在2～4 小時完成擴(kuò)增反應(yīng)。擴(kuò)增產(chǎn)物一般用電泳分析，不一定要用同位素，無放射性污染、易推廣。
(4) 對標(biāo)本的純度要求低
不需要分離病毒或及培養(yǎng)細(xì)胞，DNA 粗制品及總RNA均可作為擴(kuò)增模板?？芍苯佑门R床標(biāo)本如血液、體腔液、洗嗽液、毛發(fā)、細(xì)胞、活PCR技術(shù)概論。
25(R)-27-hydroxy Cholesterol 1g BNP-32 (porcine) 25mg CLCF1 Human 50mg
AZD 5153 250mg R-Palmitoyl-(1-methyl) Ethanolamide 1g HNRNPK Human 5g
H-DL-Ala-OEt . HCl 250mg H-β-(2-Thiazolyl)-Ala-OH 5mg JWH 398 (exempt preparation) 500μg
Pyrrolifene 100mg CP21R7 5g LRP4 Human 10mg
MAM2201 N-(5-chloropentyl) analog 500mg AF-DX 384 50mg Dapagliflozin ((2S)-1,2-propanediol, hydrate) 1mg
Actinomycin D 100μg A-802715 50mg Polidocanol (Polyoxyethylene lauryl ether) 500μg
Fmoc-Leu-ol 20μg AM2233 1mg Compound 48/80 (hydrochloride) 10mM*1mLinDMSO
N6022 5mg Atorvastatin 100μg AZ-1355 50mg
(Cys1??-Atrial Natriuretic Factor (4-18) amide (mouse, rabbit, rat) 1g CMV gB 2μg DL-Cycloserine 5mg
KR-33493 10mg Calcein Orange? (sodium salt) 100mg H-Tyr-OH 10mg
Inhibin a Human 20mg TALDO1 Human 25mg Trolox 10mg
KLK1 Human, His 50mg Brain-Derived Acidic Fibroblast Growth Factor (102-111) (bovine) (trifluoroacetate salt) 500mg TMOD3 Human 1mg
Boc-His(Bzl)-OH 50mg TIMP4 Human 100mg D-Ribulose-5-phosphate (sodium salt) 1mg
SAA Human 50mg (+)-Pilocarpine-d3 (hydrochloride) 10mg Splitomicin 2μg
C6 NBD Sphingomyelin (d18:1/6:0) 10mM*1mLinDMSO Boc-Tyr(PO?Me??-OH 1mg SR-4835 5mg
鸚鵡喙羽病病毒熒光-PCR法蔗糖 英文名稱對照品 含量：含量測定 20mg/支 CTAG1B/Cancer/testis antigen 1B 腫瘤/睪丸抗原1B規(guī)格: 0.2ml
D-木糖 英文名稱對照品 含量：含量測定 20mg/支 CTAG2 腫瘤/睪丸抗原2抗體規(guī)格: 0.2ml
三十烷醇 英文名稱對照品 含量：含量測定 20mg/支 CTAGE5 皮膚T細(xì)胞 瘤相關(guān)抗原5抗體（腦膜瘤表達(dá)抗原6）規(guī)格: 0.2ml
愈創(chuàng)木酚 英文名稱對照品 含量：含量測定 20mg/支 AGPAT1 溶血磷脂?；D(zhuǎn)移酶抗體規(guī)格: 0.2ml
濱蒿內(nèi)酯 英文名稱對照品 含量：含量測定 20mg/支 EBAG9/RCAS1 腫瘤相關(guān)表面抗原RCAS1抗體規(guī)格: 0.2ml
異龍腦 英文名稱對照品 含量：含量測定 20mg/支 FAM120C 構(gòu)成激活過氧化酶活化增生受體γ樣蛋白2抗體規(guī)格: 0.2ml
7—甲氧基香豆素 英文名稱對照品 含量：鑒別 20mg/支 MUM1/FLJ14868 突變的黑色素瘤相關(guān)抗原1抗體規(guī)格: 0.2ml
漢黃芩素 英文名稱對照品 含量：鑒別 20mg/支 FMNL1 成蛋白相關(guān)蛋白1抗體規(guī)格: 0.2ml
甜菊苷 英文名稱對照品 含量：鑒別 20mg/支 GAGE7/Cancer/testis antigen family 4 member 7 腫瘤/睪丸抗原家族4亞型7抗體規(guī)格: 0.2ml
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