使用方法:
一、樣品 RNA 的制備
1、用自選方法抽提病毒樣品 RNA。注意：可以選用本公司生產(chǎn)的一管式病毒 RNAout
2、或柱式病毒 RNAout。
二：RT（逆轉(zhuǎn)錄）反應(yīng)合成 cDNA
1. 按下表配制 RT 反應(yīng)體系（20 μL 體系）
2. 70℃保溫 5 分鐘變性模板后立即冰浴。
3. 嚴格按順序加入 6μL RT Buffer（含 dNTP）和 2μL MMLV 逆轉(zhuǎn)錄酶（含 RI），
反應(yīng)終體積為 20μL。
4. 42℃保溫 60 分鐘。此步為 RT 反應(yīng)。
5. 70℃保溫 10 分鐘以終止反應(yīng)，然后放置在冰上待用。合成的 cDNA 可以直接作為 PCR 模板使用，丌需要純化。
訂購信息：
產(chǎn)品名稱：伊麗莎白巴爾通體PCR實驗試劑
英文名稱：Bartonella elizabethaePCR
貨號：BJ-01R3333
產(chǎn)品規(guī)格：50T
運輸：低溫
保存：負20度
有效期：一年
貨期：現(xiàn)貨
【儲存條件及有效期】:
-20℃避光保存，避免反復(fù)凍融，有效期6個月。
【適用儀器】:
ABI7300、ABI7500、LightCycler 480、iCycleriQ5、CFX96、SLAN等熒光定量PCR儀。
【樣本采集、存放及運輸】：
u 樣本采集：各類型樣本按照常規(guī)方法采集；
u 存放：樣本在2~8℃條件下保存應(yīng)不超過72h，-70℃以下可長期保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融（多凍融3次）；
u 運輸：采用**或泡沫箱加冰密封進行運輸。
本公司產(chǎn)品僅用于科研。
【自備試劑】:
核酸提取試劑，如QIAGEN QIAamp Viral RNA Mini試劑盒，也可選擇其他合適的核酸提取產(chǎn)品。
組成及試劑配制:
1、 酶標(biāo)板：一塊（96孔）
2、 標(biāo)準(zhǔn)品（凍干品）： 2瓶，請臨用前15分鐘內(nèi)配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml，蓋好后室溫靜置大約10分鐘，同時反復(fù)顛倒/搓動以助溶解，其濃度為200 U/L，然后做系列倍比稀釋（注：不要直接在板中進行倍比稀釋），分別配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標(biāo)準(zhǔn)品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述標(biāo)準(zhǔn)品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中，混勻即可，其余濃度以此類推。
3、 樣品稀釋液：1×20ml。
4、 檢測稀釋液A：1×10ml。
5、 檢測稀釋液B：1×10ml。
實驗注意事項：
1）RT-PCR可以檢測組織、細胞、血液、等很多材料，不同的樣本有不同要求，實驗前請充分溝通確認實驗方案和樣本情況；
2）客戶盡可能提供實驗的背景信息、物種、基因準(zhǔn)確的名稱和ID號；
3）客戶盡量不要提供DNA或RNA樣品。
4）樣本保存于液氮或干冰，也可以保存于Trizol液中。
實時熒光定量PCR（quantitative real-time PCR，qPCR）是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團，利用熒光信號積累實時監(jiān)測整個PCR進程，通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對未知模板進行定量分析的方法。實時熒光定量PCR的化學(xué)原理包括探針類和非探針類兩類，探針類是利用與靶細胞序列特異性雜交的探針來指示擴增產(chǎn)物的增加，非探針類是利用熒光染料或者特異性設(shè)計的引物來指示擴增的增加。運用該技術(shù)可以對DNA、RNA樣品進行定量（包括量和相對定量）和定性分析。
主要服務(wù)：DNA或RNA的定量分析、基因表達差異分析、基因分型。
主要技術(shù)：引物設(shè)計、RNA提取、cDNA合成、qPCR。
PCR反應(yīng)的特異性決定因素為：
①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合；
②堿基配對原則；
③Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實性；
④靶基因的特異性與保守性。
其中引物與模板的正確結(jié)合是關(guān)鍵。引物與模板的結(jié)合及引物鏈的延伸是遵循堿基配對原則的。聚合酶合成反應(yīng)的忠實性及Taq DNA聚合酶耐高溫性，使反應(yīng)中模板與引物的結(jié)合(復(fù)性)可以在較高的溫度下進行，結(jié)合的特異性大大增加，被擴增的靶基因片段也就能保持很高的正確度。再通過選擇特異性和保守性高的靶基因區(qū)，其特異性程度就更高。
(2) 靈敏度高
PCR產(chǎn)物的**量是以指數(shù)方式增加的，能將皮克(pg=10-12g)量級的起始待測模板擴增到微克(ug=10-6g)水平。能從100萬個細胞中檢出一個靶細胞；在病毒的檢測中，PCR的靈敏度可達3個RFU(空斑形成單位)；在學(xué)中zui小檢出率為3個。
(3) 簡便、快速
PCR反應(yīng)用耐高溫的Taq DNA聚合酶，一次性地將反應(yīng)液加好后，即在DNA擴增液和水浴鍋上進行變性-退火-延伸反應(yīng)，一般在2～4 小時完成擴增反應(yīng)。擴增產(chǎn)物一般用電泳分析，不一定要用同位素，無放射性污染、易推廣。
(4) 對標(biāo)本的純度要求低
不需要分離病毒或及培養(yǎng)細胞，DNA 粗制品及總RNA均可作為擴增模板?？芍苯佑门R床標(biāo)本如血液、體腔液、洗嗽液、毛發(fā)、細胞、活PCR技術(shù)概論。
3-Hydroxyphenylacetic acid 10μg PKACa2- RIa2 1mg AN3199 25mg
Corydine 5mg H-Gly-Sar-Sar-OH 50μg Thiophene-2-amidoxime 50mg
DNA2 inhibitor C5 5mg Orexin B (human) 100mg Z-Gly-Phe-NH2 50mg
NO-Indomethacin 100mg AWD 131-138 5mg GRO a Human 1mg
cis-7-Hexadecenoic Acid 10g CCT018159 1mg TROVE2 Bovine, Biotin 10mM(in1mLDMSO)
SPOP-IN-6b 10mM*1mLinDMSO BOS-172722 100mg Doxorubicinone 1mg
ARV-771 10mg SP-13786 1g all-cis-7,10,13,16,19-Docosapentaenoic Acid methyl ester 500μg
Parimifasor (LYC30937) 10mg Tetrabenazine-d6 1g TWF1 Human 5μg
AT 56 5mg Fusarisetin A 100mg QTRT1 Human 5mg
Squalamine lactate (MSI-1256F) 5mg TCV-309 chloride 1mg CAY10563 1mg
AG957 2μg GLP-1R Agonist DMB 100μg Radotinib(IY-5511) 1mg
3-Cysteinylacetaminophen (trifluoroacetate salt) 100mg Sulfaproxiline (Sulfaproxylin) 10μg Glycol salicylate 5mg
UNC0321 10mg SERPINA5 Human 100mg Cardol triene 5mg
A66 1mg PtdIns-(4,5)-P2 (1,2-dioctanoyl) (sodium salt) 100μg Saxagliptin (hydrochloride) 5mg
Noradrenaline bitartrate monohydrate 1mg Ivermectin B1a-d2 500mg Buphedrone metabolite (hydrochloride) ((±)-Ephedrine stereochemistry) 10mg
伊麗莎白巴爾通體PCR實驗試劑杜鵑素 英文名稱對照品 含量：鑒別 20mg/支 YY1AP1/HCCA2 肝癌相關(guān)蛋白2抗體（轉(zhuǎn)錄因子YY1結(jié)合蛋白1抗體）規(guī)格: 0.2ml
β-谷甾醇 英文名稱對照品 含量：鑒別 20mg/支 ZNF146 鋅指蛋白146抗體規(guī)格: 0.2ml
隱丹參酮 英文名稱對照品 含量：含量測定 20mg/支 ZNF23 鋅指蛋白23抗體規(guī)格: 0.2ml
原 堿 英文名稱對照品 含量：含量測定 20mg/支 ZNF364/BCA2/RNF115 乳腺癌相關(guān)基因2抗體（鋅指蛋白364）規(guī)格: 0.2ml
脫水穿心蓮內(nèi)酯 英文名稱對照品 含量：含量測定 20mg/支 FAM89B/MMTV-R 乳腺腫瘤病毒受體同源蛋白抗體規(guī)格: 0.2ml
丹參素鈉 英文名稱對照品 含量：含量測定 20mg/支 IL-11RA 白介素11受體α/IL-11Rα抗體規(guī)格: 0.2ml
水飛薊賓 英文名稱對照品 含量：含量測定 20mg/支 KCNQ-1 鉀離子通道蛋白家族KCNQ1抗體規(guī)格: 0.1ml
五味子醇甲 英文名稱對照品 含量：含量測定 20mg/支 IL-10 白細胞介素-10抗體規(guī)格: 0.1ml
蟲草素 英文名稱對照品 含量：鑒別 20mg/支 LIPG/Endothelial lipase 內(nèi)皮脂肪酶抗體規(guī)格: 0.2ml
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