使用方法:

一、樣品 RNA 的制備

1、用自選方法抽提病毒樣品 RNA。注意：可以選用本公司生產(chǎn)的一管式病毒 RNAout

2、或柱式病毒 RNAout。

二：RT（逆轉(zhuǎn)錄）反應(yīng)合成 cDNA

1. 按下表配制 RT 反應(yīng)體系（20 μL 體系）

2. 70℃保溫 5 分鐘變性模板后立即冰浴。

3. 嚴(yán)格按順序加入 6μL RT Buffer（含 dNTP）和 2μL MMLV 逆轉(zhuǎn)錄酶（含 RI），

反應(yīng)終體積為 20μL。

4. 42℃保溫 60 分鐘。此步為 RT 反應(yīng)。

5. 70℃保溫 10 分鐘以終止反應(yīng)，然后放置在冰上待用。合成的 cDNA 可以直接作為 PCR 模板使用，丌需要純化。

訂購信息：

產(chǎn)品名稱：禽病毒性關(guān)節(jié)炎熒光-PCR法

英文名稱：Avian Viral arthritis virus （AVAV）RTPCR
貨號：BJ-01R3303

產(chǎn)品規(guī)格：50T

運(yùn)輸：低溫

保存：負(fù)20度

有效期：一年

貨期：現(xiàn)貨

【儲存條件及有效期】:

-20℃避光保存，避免反復(fù)凍融，有效期6個月。

【適用儀器】:

ABI7300、ABI7500、LightCycler 480、iCycleriQ5、CFX96、SLAN等熒光定量PCR儀。

【樣本采集、存放及運(yùn)輸】：

u 樣本采集：各類型樣本按照常規(guī)方法采集；

u 存放：樣本在2~8℃條件下保存應(yīng)不超過72h，-70℃以下可長期保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融（多凍融3次）；

u 運(yùn)輸：采用**或泡沫箱加冰密封進(jìn)行運(yùn)輸。

本公司產(chǎn)品僅用于科研。

【自備試劑】:

核酸提取試劑，如QIAGEN QIAamp Viral RNA Mini試劑盒，也可選擇其他合適的核酸提取產(chǎn)品。

組成及試劑配制:

1、 酶標(biāo)板：一塊（96孔）

2、 標(biāo)準(zhǔn)品（凍干品）： 2瓶，請臨用前15分鐘內(nèi)配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml，蓋好后室溫靜置大約10分鐘，同時反復(fù)顛倒/搓動以助溶解，其濃度為200 U/L，然后做系列倍比稀釋（注：不要直接在板中進(jìn)行倍比稀釋），分別配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標(biāo)準(zhǔn)品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述標(biāo)準(zhǔn)品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中，混勻即可，其余濃度以此類推。

3、 樣品稀釋液：1×20ml。

4、 檢測稀釋液A：1×10ml。

5、 檢測稀釋液B：1×10ml。

實驗注意事項：

1）RT-PCR可以檢測組織、細(xì)胞、血液、等很多材料，不同的樣本有不同要求，實驗前請充分溝通確認(rèn)實驗方案和樣本情況；

2）客戶盡可能提供實驗的背景信息、物種、基因準(zhǔn)確的名稱和ID號；

3）客戶盡量不要提供DNA或RNA樣品。

4）樣本保存于液氮或干冰，也可以保存于Trizol液中。

實時熒光定量PCR（quantitative real-time PCR，qPCR）是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán)，利用熒光信號積累實時監(jiān)測整個PCR進(jìn)程，通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對未知模板進(jìn)行定量分析的方法。實時熒光定量PCR的化學(xué)原理包括探針類和非探針類兩類，探針類是利用與靶細(xì)胞序列特異性雜交的探針來指示擴(kuò)增產(chǎn)物的增加，非探針類是利用熒光染料或者特異性設(shè)計的引物來指示擴(kuò)增的增加。運(yùn)用該技術(shù)可以對DNA、RNA樣品進(jìn)行定量（包括量和相對定量）和定性分析。

主要服務(wù)：DNA或RNA的定量分析、基因表達(dá)差異分析、基因分型。

主要技術(shù)：引物設(shè)計、RNA提取、cDNA合成、qPCR。

PCR反應(yīng)的特異性決定因素為：

①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合；

②堿基配對原則；

③Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實性；

④靶基因的特異性與保守性。

其中引物與模板的正確結(jié)合是關(guān)鍵。引物與模板的結(jié)合及引物鏈的延伸是遵循堿基配對原則的。聚合酶合成反應(yīng)的忠實性及Taq DNA聚合酶耐高溫性，使反應(yīng)中模板與引物的結(jié)合(復(fù)性)可以在較高的溫度下進(jìn)行，結(jié)合的特異性大大增加，被擴(kuò)增的靶基因片段也就能保持很高的正確度。再通過選擇特異性和保守性高的靶基因區(qū)，其特異性程度就更高。

(2) 靈敏度高

PCR產(chǎn)物的**量是以指數(shù)方式增加的，能將皮克(pg=10-12g)量級的起始待測模板擴(kuò)增到微克(ug=10-6g)水平。能從100萬個細(xì)胞中檢出一個靶細(xì)胞；在病毒的檢測中，PCR的靈敏度可達(dá)3個RFU(空斑形成單位)；在學(xué)中zui小檢出率為3個。

(3) 簡便、快速

PCR反應(yīng)用耐高溫的Taq DNA聚合酶，一次性地將反應(yīng)液加好后，即在DNA擴(kuò)增液和水浴鍋上進(jìn)行變性-退火-延伸反應(yīng)，一般在2～4 小時完成擴(kuò)增反應(yīng)。擴(kuò)增產(chǎn)物一般用電泳分析，不一定要用同位素，無放射性污染、易推廣。

(4) 對標(biāo)本的純度要求低

不需要分離病毒或及培養(yǎng)細(xì)胞，DNA 粗制品及總RNA均可作為擴(kuò)增模板。可直接用臨床標(biāo)本如血液、體腔液、洗嗽液、毛發(fā)、細(xì)胞、活PCR技術(shù)概論。

LH 21  500μg  DOK4 Human  10μg  D-myo-Inositol-2,4,5-triphosphate (sodium salt)  50mg

Sodium salicylate  10mg  H-D-Homopro-OMe . HCl  1mg  Pentadecanoic acid  500μg

RRx-001  100mg  BAY-1816032  100mg  Acrp30 (108-244) Human  10mg

3-(2-Pyridyl)-D-Alanine  2μg  Clomipramine HCl  25g  SARS Mosaic S(C)  5mg

NNC-0640  500mg  Phe-Met-Arg-Phe amide trifluoroacetate  10mg  LTURM 36  1mg

1,3-Dioleoyl-rac-glycerol  5mg  Tazemetostat hydrobromide  0.1mg  NSL1 Human  10μg

Flumethasone  10mg  Ribocil  50mg  XMD-17-51 Trifluoroacetate  5mg

NKP-1339  1mg  L-Fucitol  50mg  MMP 7 Human  1mg

(Glu13·1?·2?)-Osteocalcin (1-46) (mouse)  5mg  LDE225 Diphosphate  50mg  16-phenoxy tetranor Prostaglandin F2α methyl amide  25mg

PF-06446846 hydrochloride  50mg  Kasugamycin hydrochloride hydrate  10mg  1,2-Dipalmitoyl-3-Decanoyl-rac-glycerol  5g

H-Trp-Gly-Tyr-OH  1mg  GNF-5837  5μg  Compound 2  10mg

KW-6055  1mg  GTF3C6 Human  5g  Halazone  5mg

Telomerase-IN-2  10μg  DnaJ E.Coli  10mg  Amisulpride  10mg

Losartan D4 Carboxylic Acid  1mg  D-myo-Inositol-1,4-diphosphate (sodium salt)  5mg  AGL-2263  5mg

Termitomycamide E  5mg  Dengue Rapid Test  10mM*1mLinDMSO  16-phenoxy tetranor Prostaglandin F2α methyl amide  25mg

禽病毒性關(guān)節(jié)炎熒光-PCR法普羅布考 英文名稱對照品 含量：供含量測定用 20mg/支 IGF-IRβ  胰島素樣生長因子1受體β抗體規(guī)格: 0.2ml

芐 氨酸 英文名稱對照品 含量：UV法含量測定 20mg/支 HARS  組氨酸t(yī)RNA連接酶抗體規(guī)格: 0.2ml

鹽酸特比萘芬 英文名稱對照品 含量：UV法含量測定用 20mg/支 HNRPC  異質(zhì)性核糖核蛋白C1/C2抗體規(guī)格: 0.2ml

鞣酸小檗堿 英文名稱對照品 含量：TLC法鑒別 20mg/支 Mycobacterium human  人結(jié)核桿  體蛋白抗體規(guī)格: 0.2ml

甲磺酸多沙唑嗪 英文名稱對照品 含量：HPLC法含量測定 20mg/支 NF-ATc4  T細(xì)胞激活核轉(zhuǎn)錄因子4抗體規(guī)格: 0.2ml

昔美酸沙美特羅 英文名稱對照品 含量：含量測定（HPLC） 20mg/支 Unc18-3  突觸囊泡融合蛋白Unc18-3抗體規(guī)格: 0.2ml

鹽酸喹那普利 英文名稱對照品 含量：HPLC法含量測定 20mg/支 caspase-8 subunit p18  半胱氨酸蛋白酶8抗體規(guī)格: 0.2ml

利培酮 英文名稱對照品 含量：HPLC法含量測定 20mg/支 IRAK1  白介素-1受體相關(guān)激酶1抗體規(guī)格: 0.1ml

依立雄胺???愛普列特） 英文名稱對照品 含量：UV法含量測定 20mg/支 phospho-APE(Ser1417)  磷酸化肌動蛋白結(jié)合蛋白Girdin抗體規(guī)格: 0.1ml

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