PCR反應(yīng)的特異性決定因素為：

①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合；

②堿基配對原則；

③Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性；

④靶基因的特異性與保守性。

其中引物與模板的正確結(jié)合是關(guān)鍵。引物與模板的結(jié)合及引物鏈的延伸是遵循堿基配對原則的。聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性及Taq DNA聚合酶耐高溫性，使反應(yīng)中模板與引物的結(jié)合(復(fù)性)可以在較高的溫度下進(jìn)行，結(jié)合的特異性大大增加，被擴(kuò)增的靶基因片段也就能保持很高的正確度。再通過選擇特異性和保守性高的靶基因區(qū)，其特異性程度就更高。

(2) 靈敏度高

PCR產(chǎn)物的**量是以指數(shù)方式增加的，能將皮克(pg=10-12g)量級的起始待測模板擴(kuò)增到微克(ug=10-6g)水平。能從100萬個(gè)細(xì)胞中檢出一個(gè)靶細(xì)胞；在病毒的檢測中，PCR的靈敏度可達(dá)3個(gè)RFU(空斑形成單位)；在學(xué)中zui小檢出率為3個(gè)。

(3) 簡便、快速

PCR反應(yīng)用耐高溫的Taq DNA聚合酶，一次性地將反應(yīng)液加好后，即在DNA擴(kuò)增液和水浴鍋上進(jìn)行變性-退火-延伸反應(yīng)，一般在2～4 小時(shí)完成擴(kuò)增反應(yīng)。擴(kuò)增產(chǎn)物一般用電泳分析，不一定要用同位素，無放射性污染、易推廣。

(4) 對標(biāo)本的純度要求低

不需要分離病毒或及培養(yǎng)細(xì)胞，DNA 粗制品及總RNA均可作為擴(kuò)增模板?？芍苯佑门R床標(biāo)本如血液、體腔液、洗嗽液、毛發(fā)、細(xì)胞、活PCR技術(shù)概論。

訂購信息：

產(chǎn)品名稱：禽網(wǎng)狀內(nèi)皮組織增殖病病毒熒光-PCR法

英文名稱：Avian Reticuloendotheliosis Virus(REV)RTPCR
貨號：BJ-01R3299

產(chǎn)品規(guī)格：50T

運(yùn)輸：低溫

保存：負(fù)20度

有效期：一年

貨期：現(xiàn)貨

【儲(chǔ)存條件及有效期】:

-20℃避光保存，避免反復(fù)凍融，有效期6個(gè)月。

【適用儀器】:

ABI7300、ABI7500、LightCycler 480、iCycleriQ5、CFX96、SLAN等熒光定量PCR儀。

【樣本采集、存放及運(yùn)輸】：

u 樣本采集：各類型樣本按照常規(guī)方法采集；

u 存放：樣本在2~8℃條件下保存應(yīng)不超過72h，-70℃以下可長期保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融（多凍融3次）；

u 運(yùn)輸：采用**或泡沫箱加冰密封進(jìn)行運(yùn)輸。

本公司產(chǎn)品僅用于科研。

【自備試劑】:

核酸提取試劑，如QIAGEN QIAamp Viral RNA Mini試劑盒，也可選擇其他合適的核酸提取產(chǎn)品。

組成及試劑配制:

1、 酶標(biāo)板：一塊（96孔）

2、 標(biāo)準(zhǔn)品（凍干品）： 2瓶，請臨用前15分鐘內(nèi)配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml，蓋好后室溫靜置大約10分鐘，同時(shí)反復(fù)顛倒/搓動(dòng)以助溶解，其濃度為200 U/L，然后做系列倍比稀釋（注：不要直接在板中進(jìn)行倍比稀釋），分別配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標(biāo)準(zhǔn)品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述標(biāo)準(zhǔn)品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中，混勻即可，其余濃度以此類推。

3、 樣品稀釋液：1×20ml。

4、 檢測稀釋液A：1×10ml。

5、 檢測稀釋液B：1×10ml。

使用方法:

一、樣品 RNA 的制備

1、用自選方法抽提病毒樣品 RNA。注意：可以選用本公司生產(chǎn)的一管式病毒 RNAout

2、或柱式病毒 RNAout。

二：RT（逆轉(zhuǎn)錄）反應(yīng)合成 cDNA

1. 按下表配制 RT 反應(yīng)體系（20 μL 體系）

2. 70℃保溫 5 分鐘變性模板后立即冰浴。

3. 嚴(yán)格按順序加入 6μL RT Buffer（含 dNTP）和 2μL MMLV 逆轉(zhuǎn)錄酶（含 RI），

反應(yīng)終體積為 20μL。

4. 42℃保溫 60 分鐘。此步為 RT 反應(yīng)。

5. 70℃保溫 10 分鐘以終止反應(yīng)，然后放置在冰上待用。合成的 cDNA 可以直接作為 PCR 模板使用，丌需要純化。

實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)：

1）RT-PCR可以檢測組織、細(xì)胞、血液、等很多材料，不同的樣本有不同要求，實(shí)驗(yàn)前請充分溝通確認(rèn)實(shí)驗(yàn)方案和樣本情況；

2）客戶盡可能提供實(shí)驗(yàn)的背景信息、物種、基因準(zhǔn)確的名稱和ID號；

3）客戶盡量不要提供DNA或RNA樣品。

4）樣本保存于液氮或干冰，也可以保存于Trizol液中。

實(shí)時(shí)熒光定量PCR（quantitative real-time PCR，qPCR）是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán)，利用熒光信號積累實(shí)時(shí)監(jiān)測整個(gè)PCR進(jìn)程，通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對未知模板進(jìn)行定量分析的方法。實(shí)時(shí)熒光定量PCR的化學(xué)原理包括探針類和非探針類兩類，探針類是利用與靶細(xì)胞序列特異性雜交的探針來指示擴(kuò)增產(chǎn)物的增加，非探針類是利用熒光染料或者特異性設(shè)計(jì)的引物來指示擴(kuò)增的增加。運(yùn)用該技術(shù)可以對DNA、RNA樣品進(jìn)行定量（包括量和相對定量）和定性分析。

主要服務(wù)：DNA或RNA的定量分析、基因表達(dá)差異分析、基因分型。

主要技術(shù)：引物設(shè)計(jì)、RNA提取、cDNA合成、qPCR。

GnRH Associated Peptide (GAP) (1-13), human  1g  Amyloid β-Peptide (1-42) (human)  1g  Exendin-4  5g

FEN1 Human  50mg  DL-Glutamine  10mg  Cinchophen  100mg

EGF Long Human  25mg  HPSE Human  5mg  Phytic acid dodecasodium salt hydrate  25g

Cyclo(-Arg-Gly-Asp-D-Tyr-ε-azido-Nle)  50mg  Cy7 azide  25mg  Gardiquimod trifluoroacetate  10mg

LCAT Human, HEK  2μg  Lipopolysaccharide  10mg  1V209  100mg

Zika Envelope Domain-3  1g  GOT2 Human, Active  10mg  CTGF Human, HEK  25mg

NUDT16 Human  10mg  HMN-154  1mg  NABP1 Human  100mg

Ac-ESMD-CHO (trifluoroacetate salt)  5g  Tau Peptide (472-487)-PEG6-(507-526) (human)  10μg  Eriocitrin  10mg

1-Tridecanoyl-rac-glycerol  1mg  PTI-2 (hydrochloride)  25μg  VZV gE  2μg

6-hydroxy Warfarin  10mg  Pravadoline  10mM(in1mLDMSO)  CD68 Human  5g

(Val12??)-Laminin α-4 Chain (1259-1266) (human)  10mM*1mLinDMSO  1-Naphthoic Acid  5mg  Ethylbenzyl-CYBINACA  500mg

11(E)-Eicosenoic Acid  25mg  2-O-methyl PAF C-16  1mg  CRTAM Human  1mg

GFRA3 Human  5mg  DPBQ  1mg  6-Aminopenicillanic acid  1mg

Arg-Gly-Asp-Cys  5mg  Evatanepag  5mg  Digitoxigenin  5mg

H-Arg-Arg-Arg-Arg-Arg-Arg-OH  5μg  Monobenzone  1g  PBLD Human  10mg

禽網(wǎng)狀內(nèi)皮組織增殖病病毒熒光-PCR法鹽酸嗎啉胍 英文名稱對照品 含量：UV法含量測定 20mg/支 C3c/Complement fragment 3c  補(bǔ)體片段C3c抗體規(guī)格: 0.2ml

水楊酰胺 英文名稱對照品 含量：HPLC法含量測定用 20mg/支 phospho-PI3 Kinase p110 beta(Ser1070)  磷酸化磷脂酰肌醇激酶（PI3Kβ）抗體規(guī)格: 0.1ml

非普拉宗 英文名稱對照品 含量：UV法溶出度檢查用 20mg/支 phospho-PP2A alpha(Tyr307)  磷酸化蛋白磷酸酶2A（PP2Aα）抗體規(guī)格: 0.1ml

茴三硫 英文名稱對照品 含量：UV法含量測定 20mg/支 phospho-PP2A alpha/beta(Tyr119)  磷酸化蛋白磷酸酶2A（PP2Aα）抗體規(guī)格: 0.1ml

三氯叔丁醇 英文名稱對照品 含量：GC鑒別用 20mg/支 phospho-eIF4EBP1(Thr36)  磷酸化4E結(jié)合蛋白1抗體規(guī)格: 0.1ml

葡醛酸鈉 英文名稱對照品 含量：含量測定（UV） 20mg/支 phospho-eIF4EBP1/2/3(Thr36)  磷酸化4E結(jié)合蛋白1,2,3抗體規(guī)格: 0.1ml

對氯苯酚 英文名稱對照品 含量：供檢查用 20mg/支 PI3 Kinase p110 beta  磷脂酰肌醇激酶（PI3Kβ）抗體規(guī)格: 0.1ml

鹽酸賽庚啶 英文名稱對照品 含量：HPLC法含量測定 20mg/支 SNX27  SNX27蛋白抗體規(guī)格: 0.2ml

氨基比林 英文名稱對照品 含量：含量測定用 20mg/支 TRPV4/TRP12  瞬時(shí)受體電位蛋白12抗體規(guī)格: 0.2ml

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