訂購信息:
產(chǎn)品名稱:弓形桿菌屬通用熒光-PCR法
英文名稱:Arcobacter spp.PCR
貨號:BJ-01R3267
產(chǎn)品規(guī)格:50T
運輸:低溫
保存:負20度
有效期:一年
貨期:現(xiàn)貨
【儲存條件及有效期】:
-20℃避光保存,避免反復凍融,有效期6個月。
【適用儀器】:
ABI7300、ABI7500、LightCycler 480、iCycleriQ5、CFX96、SLAN等熒光定量PCR儀。
【樣本采集、存放及運輸】:
u 樣本采集:各類型樣本按照常規(guī)方法采集;
u 存放:樣本在2~8℃條件下保存應不超過72h,-70℃以下可長期保存,但應避免反復凍融(多凍融3次);
u 運輸:采用**或泡沫箱加冰密封進行運輸。
本公司產(chǎn)品僅用于科研。
【自備試劑】:
核酸提取試劑,如QIAGEN QIAamp Viral RNA Mini試劑盒,也可選擇其他合適的核酸提取產(chǎn)品。
組成及試劑配制:
1、 酶標板:一塊(96孔)
2、 標準品(凍干品): 2瓶,請臨用前15分鐘內(nèi)配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml,蓋好后室溫靜置大約10分鐘,同時反復顛倒/搓動以助溶解,其濃度為200 U/L,然后做系列倍比稀釋(注:不要直??在板中進行倍比稀釋),分別配制成200 U/L,100 U/L,50 U/L,25 U/L,12.5 U/L,6.25 U/L,3.12 U/L,樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標準品:取0.3ml (不要少于0.3ml )200 U/L的上述標準品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中,混勻即可,其余濃度以此類推。
3、 樣品稀釋液:1×20ml。
4、 檢測稀釋液A:1×10ml。
5、 檢測稀釋液B:1×10ml。
使用方法:
一、樣品 RNA 的制備
1、用自選方法抽提病毒樣品 RNA。注意:可以選用本公司生產(chǎn)的一管式病毒 RNAout
2、或柱式病毒 RNAout。
二:RT(逆轉(zhuǎn)錄)反應合成 cDNA
1. 按下表配制 RT 反應體系(20 μL 體系)
2. 70℃保溫 5 分鐘變性模板后立即冰浴。
3. 嚴格按順序加入 6μL RT Buffer(含 dNTP)和 2μL MMLV 逆轉(zhuǎn)錄酶(含 RI),
反應終體積為 20μL。
4. 42℃保溫 60 分鐘。此步為 RT 反應。
5. 70℃保溫 10 分鐘以終止反應,然后放置在冰上待用。合成的 cDNA 可以直接作為 PCR 模板使用,丌需要純化。
實驗注意事項:
1)RT-PCR可以檢測組織、細胞、血液、等很多材料,不同的樣本有不同要求,實驗前請充分溝通確認實驗方案和樣本情況;
2)客戶盡可能提供實驗的背景信息、物種、基因準確的名稱和ID號;
3)客戶盡量不要提供DNA或RNA樣品。
4)樣本保存于液氮或干冰,也可以保存于Trizol液中。
實時熒光定量PCR(quantitative real-time PCR,qPCR)是指在PCR反應體系中加入熒光基團,利用熒光信號積累實時監(jiān)測整個PCR進程,通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法。實時熒光定量PCR的化學原理包括探針類和非探針類兩類,探針類是利用與靶細胞序列特異性雜交的探針來指示擴增產(chǎn)物的增加,非探針類是利用熒光染料或者特異性設計的引物來指示擴增的增加。運用該技術(shù)可以對DNA、RNA樣品進行定量(包括量和相對定量)和定性分析。
主要服務:DNA或RNA的定量分析、基因表達差異分析、基因分型。
主要技術(shù):引物設計、RNA提取、cDNA合成、qPCR。
sodium 4-pentynoate 50μg N-ArachidonylGABA 10mg JMV 2959 hydrochloride 50mg
Teicoplanin A2-4 20μg DCZ0415 1mg L-Alanyl-L-Glutamine 5mg
L-trans-2,4-PDC 10mM*1mLinDMSO Fmoc-D-Glu-OtBu 0.5mg Z-His-Phe-Phe-OEt 100mg
2-Methylacetophenone 5mg 2-carboxy-Pyrimidine 5μg NOD-IN-1 10mg
IRAK-1-4 Inhibitor I 10mM(in1mLDMSO) A 205804 50mg MK-7622 (M1 receptor modulator) 5mg
Cladribine 50mg S-Allyl-L-cysteine 100mg Boc-Phe(3-Cl)-OH 10mg
Isomaltotriose 10mg RS 127445 10mg Desacetyl Cefapirin (sodium salt) 10mg
Prostaglandin K2 5mg tert-Butyldimethylsilyl Chloride 5g Boc-Phe(4-F)-OH 1mg
bis(7)-Tacrine 10mg TFFH 25g NPC-15437 (hydrochloride) 100μg
2,4-Pyridinedicarboxylic Acid (hydrate) 50mg PD 169316 1mg Zika NS1, HEK 5μg
Guanidinosuccinic acid 500ug L-690,488 1mg eukaryotic translation initiation factor 3 10mg
15(R)-Lipoxin A4 5μg Cardanol monoene 100mg EXOSC4 Human 5mg
Clencyclohexerol 10mg (2R,3S)-Boc-3-phenylisoserine 20μg Microtubule-associated protein tau (26-44) 50mg
Resiquimod (R-848) 10mg Trametinib DMSO solvate 5g GTF2A1 Human 50mg
JWH 081-N-(cyclohexylmethyl) analog 25mg Ubiquitin Isopeptidase Inhibitor I 10mM*1mLinDMSO Picfeltarraenin IA 10mg
弓形桿菌屬通用熒光-PCR法酒石酸美托洛爾 英文名稱對照品 含量:含量測定 20mg/支 RHOBTB1 Rho相關(guān)結(jié)構(gòu)域BTB蛋白質(zhì)1抗體規(guī)格: 0.2ml
氟哌利多 英文名稱對照品 含量:含量測定 20mg/支 RIL 抑癌基因PDLIM4抗體規(guī)格: 0.1ml
硝基呋喃丙烯酸 英文名稱對照品 含量:檢查 20mg/支 RIN1 RAS抑制蛋白1抗體規(guī)格: 0.2ml
豬去氧膽酸 英文名稱對照品 含量:含量測定 20mg/支 RND3/RHOE Rho家族GTP酶3抗體規(guī)格: 0.1ml
雙羥萘酸噻嘧啶 英文名稱對照品 含量:含量測定 20mg/支 RSRC2 食道癌抑制生長蛋白抗體規(guī)格: 0.2ml
雙羥萘酸 英文名稱對照品 含量:含量測定 20mg/支 PARG1/Rho GTPase activating protein 29 Rho GTP酶激活蛋白29抗體規(guī)格: 0.2ml
酚酞 英文名稱對照品 含量:含量測定 20mg/支 SASH1 腫瘤抑制基因PEPE1抗體規(guī)格: 0.2ml
水楊酸片 英文名稱對照品 含量:溶出度校正片 20mg/支 SESN3 Sestrin3抗體規(guī)格: 0.2ml
氨基己酸 英文名稱對照品 含量:鑒別 20mg/支 LSP1 白細胞F肌動蛋白結(jié)合蛋白抗體規(guī)格: 0.2ml
PCR反應的特異性決定因素為:
①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合;
②堿基配對原則;
③Taq DNA聚合酶合成反應的忠實性;
④靶基因的特異性與保守性。
其中引物與模板的正確結(jié)合是關(guān)鍵。引物與模板的結(jié)合及引物鏈的延伸是遵循堿基配對原則的。聚合酶合成反應的忠實性及Taq DNA聚合酶耐高溫性,使反應中模板與引物的結(jié)合(復性)可以在較高的溫度下進行,結(jié)合的特異性大大增加,被擴增的靶基因片段也就能保持很高的正確度。再通過選擇特異性和保守性高的靶基因區(qū),其特異性程度就更高。
(2) 靈敏度高
PCR產(chǎn)物的**量是以指數(shù)方式增加的,能將皮克(pg=10-12g)量級的起始待測模板擴增到微克(ug=10-6g)水平。能從100萬個細胞中檢出一個靶細胞;在病毒的檢測中,PCR的靈敏度可達3個RFU(空斑形成單位);在學中zui小檢出率為3個。
(3) 簡便、快速
PCR反應用耐高溫的Taq DNA聚合酶,一次性地將反應液加好后,即在DNA擴增液和水浴鍋上進行變性-退火-延伸反應,一般在2~4 小時完成擴增反應。擴增產(chǎn)物一般用電泳分析,不一定要用同位素,無放射性污染、易推廣。
(4) 對標本的純度要求低
不需要分離病毒或及培養(yǎng)細胞,DNA 粗制品及總RNA均可作為擴增模板??芍苯佑门R床標本如血液、體腔液、洗嗽液、毛發(fā)、細胞、活PCR技術(shù)概論。
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