微生物菌種的培養(yǎng)：
⒈ 孢子制備
⑴ 放線菌孢子的制備
一般采用瓊脂斜面培養(yǎng)基，培養(yǎng)基中含有一些適合產(chǎn)孢子的營養(yǎng)成分，如麩皮、豌豆浸汁、蛋白胨和一些無機(jī)鹽等。碳源和氮源不要太豐富(碳源約為1％，氮源不超過0.5％)，碳源豐富容易造成生理酸性的營養(yǎng)環(huán)境，不利于放線菌孢子的形成，氮源豐富則有利于菌絲繁殖而不利于孢子形成。一般情況下，干燥和限制營養(yǎng)可直接或間接誘導(dǎo)孢子形成。放線菌斜面的培養(yǎng)溫度大多數(shù)為28 ℃，少數(shù)為37 ℃，培養(yǎng)時(shí)間為5～14天。
⑵ 霉菌孢子的制備
霉菌的孢子培養(yǎng)，一般以大米、小米、玉米、麩皮、麥粒等天然農(nóng)產(chǎn)品為培養(yǎng)基。這是由于這些農(nóng)產(chǎn)品中的營養(yǎng)成分較適合霉菌的孢子繁殖，而且這類培養(yǎng)基的表面積較大，可獲得大量的孢子。霉菌的培養(yǎng)一般為25～28 ℃，培養(yǎng)時(shí)間為4～14天。
⒉ 種子制備
⑴ 搖瓶種子制備
搖瓶種子進(jìn)罐，常采用母瓶、子瓶兩級(jí)培養(yǎng)，有時(shí)母瓶種子也可以直接進(jìn)罐。種子培養(yǎng)基要求比較豐富和完全，并易被菌體分解利用，氮源豐富有利于菌絲生長。原則上各種營養(yǎng)成分不宜過濃，子瓶培養(yǎng)基濃度比母瓶略高，更接近種子罐的培養(yǎng)基配方。
⑵ 種子罐種子制備
種子罐種子制備的工藝過程，因菌種不同而異，一般可分為種子、二級(jí)種子和三級(jí)種子的制備。孢子(或搖瓶菌絲)被接入到體積較小的種子罐中，經(jīng)培養(yǎng)后形成大量的菌絲，這樣的種子稱為種子，把種子轉(zhuǎn)入發(fā)酵罐內(nèi)發(fā)酵，稱為二級(jí)發(fā)酵。如果將種子接入體積較大的種子罐內(nèi)，經(jīng)過培養(yǎng)形成更多的菌絲，這樣制備的種子稱為二級(jí)種子，將二級(jí)種子轉(zhuǎn)入發(fā)酵罐內(nèi)發(fā)酵，稱為三級(jí)發(fā)酵。同樣道理，使用三級(jí)種子的發(fā)酵，稱為四級(jí)發(fā)酵。
基本信息：
產(chǎn)品名稱：溫和氣單胞菌培養(yǎng)
拉丁文:
Aeromonas sobria
分離基物: 魚
提供形式: 凍干粉
**等級(jí): 1
模式菌株: yes
培養(yǎng)基: 營養(yǎng)肉汁瓊脂：牛肉膏 3.0g，蛋白胨 10.0g，NaCl 5.0g，瓊脂 15.0g，蒸餾水 1.0L，pH7.0。[注] 培養(yǎng)芽孢桿菌時(shí)加入5mg MnSO4·H2O，則有利于產(chǎn)生芽孢。pH7.0。121℃，15min。
生長條件: 30℃，好氧
培養(yǎng)方法:
培養(yǎng)基 0012
生長條件 28℃
存儲(chǔ)條件 液氮超低溫凍結(jié)法；礦物油法；定期移植法
培養(yǎng)及打管說明：
1、安瓿瓶開封：用浸過75％酒精的脫脂棉擦凈安瓿管，用火焰加熱其頂端，滴少量無菌水至加熱頂端使之破裂，用銼刀或者鑷子敲下已破裂的安瓿管頂端。
2、菌株恢復(fù)培養(yǎng)：用無菌吸管吸取0.3--0.5ml適宜的液體培養(yǎng)基，滴入安瓿管內(nèi)，輕輕振蕩，使凍干菌體溶解呈懸浮狀。吸取全部菌體懸浮液，移植于1-2支建議的培養(yǎng)基試管中，并在建議的條件下培養(yǎng)。
3、注意事項(xiàng)：菌種活化前，請(qǐng)將安瓿管保存在6-10℃的環(huán)境下，某些菌種經(jīng)過冷凍干燥保存后，延遲期較長，需要連續(xù)兩次繼代培養(yǎng)才能正常生長
4、復(fù)蘇后的菌種在傳1-2代后使用。
5、暫不啟開的安瓿及復(fù)蘇后需保藏的斜面應(yīng)于4℃中保藏。
保藏方法：
1. 傳代培養(yǎng)保藏法
又有斜面培養(yǎng)、穿刺培養(yǎng)、皰肉培養(yǎng)基培養(yǎng)等（后者作保藏厭氧**用），培養(yǎng)后于4-6℃冰箱內(nèi)保存。
2. 液體石蠟覆蓋保藏法
是傳代培養(yǎng)的變相方法，能夠適當(dāng)延長保藏時(shí)間，它是在斜面培養(yǎng)物和穿刺培養(yǎng)物上面覆蓋的液體石蠟，一方面可防止因培養(yǎng)基水分蒸發(fā)而引起菌種死亡，另一方面可阻止氧氣進(jìn)入，以減弱代謝作用。
3. 載體保藏法
是將微生物吸附在適當(dāng)?shù)妮d體，如土壤、沙子、硅膠、濾紙上，而后進(jìn)行干燥的保藏法，例如沙土保藏法和濾紙保藏法應(yīng)用相當(dāng)廣泛。
4. 寄主保藏法
用于目前尚不能在人工培養(yǎng)基上生長的微生物，如病毒、立克次氏體、螺旋體等，它們必須在生活的動(dòng)物、昆蟲、雞胚內(nèi)感染并傳代，此法相當(dāng)于一般微生物的傳代培養(yǎng)保藏法。病毒等微生物亦可用其他方法如液氮保藏法與冷凍干燥保藏法進(jìn)行保藏。
5. 冷凍保藏法
可分低溫冰箱（-20-30℃，-50-80℃）、干冰酒精快速凍結(jié)（約-70℃）和液氮（-196℃）等保藏法。
6. 冷凍干燥保藏法
先使微生物在極低溫度（-70℃左右）下快速冷凍，然后在減壓下利用升華現(xiàn)象除去水分（真空干燥）。有些方法如濾紙保藏法、液氮保藏法和冷凍干燥保藏法等均需使用保護(hù)劑來制備細(xì)胞懸液，以防止因冷凍或水分不斷升華對(duì)細(xì)胞的損害。
葡萄糖胰蛋白胨肉湯 (CM0073) Oxoid
Rappaport-Vassiliadis R10 Broth
MUG培養(yǎng)基 100(g)
DFI瓊脂（阪崎腸桿顯色培養(yǎng)基） 1000mL/瓶
Kligler 鐵瓊脂 (CM0033) Oxoid
Nutrient agar營養(yǎng)瓊脂 1.05450.0500MERCK默克
10%氯化鈉胰蛋白胨大豆肉湯 250(g)
K-F 鏈球瓊脂 (CM0701) Oxoid
麥芽浸出液瓊脂 分離計(jì)數(shù)酵母和霉500g
CASO broth casein-peptone soyameal-peptone agar USP(TSA) 1.05458.0500MERCK默克
煌綠肉湯增液基礎(chǔ) 250(g)
溫和氣單胞菌培養(yǎng)Mouse Anti-rat IgG/FITC FITC標(biāo)記的小鼠抗大鼠IgG 0.3ml
phospho-p53BP1(Ser25/29) 磷酸化p53結(jié)合蛋白1抗體 0.1ml
Mouse Anti-human IgG(3D3)/RBITC 羅丹明標(biāo)記的鼠抗人IgG單克隆抗體 0.1ml
Phospho-Smad2(Thr220) 磷酸化細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)分子SMAD2抗體 0.1ml
E.coli O139 抗志賀大腸桿O139抗體（仔豬水腫病志賀大腸桿O139） 0.2ml
Endomucin 內(nèi)皮粘蛋白EMCN抗體 0.2ml
PGRPS 肽聚糖識(shí)別蛋白1抗體 0.2ml
LYL1 細(xì)胞性白血病相關(guān)序列1抗體 0.2ml
EVC2 膜蛋白EVC2抗體 0.1ml
HAND1 心臟和神經(jīng)嵴衍生蛋白1抗體 0.2ml
VGLUT1/BNP1 腦特異性鈉依賴無機(jī)磷轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白抗體 0.2ml
Phospho-CEBP alpha (Ser21) 磷酸化轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子CEBP α 抗體 0.1ml
factor VIII(FVIII) human 第八因子相關(guān)抗原抗體 0.1ml
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