【友情提示】：本產品僅供科研研究使用，不得用于臨床直接檢測。避免給您帶來不必要的損失，請仔細閱讀購買說明！

產品名稱：游離脂肪酸（NEFA）含量測定試劑盒
規(guī)格：詳見說明
測試方法：詳見說明
客戶自備儀器和試劑：
紫外分光光度計、臺式離心機、水浴鍋、可調式移液器、1 mL石英比色皿和蒸餾水。
特點：
       1、優(yōu)化設計的實驗方案，1小時即可完成
       2、靈敏度高，操作便捷
       3、試劑盒提供檢測果糖所需的全套試劑 
常見樣本處理方法：
1、血清（漿）樣品：直接檢測。
2、組織：按照組織質量（g） ：提取液體積(mL)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g組織，
加入 1mL提取液），進行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。

樣品制備：
1）. 直接或稀釋使用清亮無色中性液體樣品，體積可達2.000ml。
2）. 過濾混濁溶液。
3）. 除去樣品中的CO 2 （果糖含量測試盒說明書過過濾）。
4 ）. 果糖含量測試盒說明書過加氫氧化鉀或氫氧化鈉將酸性樣品的PH值調至8.0。
5 ）. 調整酸性淺色樣品的PH值至8.0，孵育約15分鐘。
6 ）. 用空白樣品做對照測定有色樣品（如有必要調整PH值至8.0）。
7 ）. 用PVPP（ 聚乙烯吡咯烷酮）或聚酰胺處理深色未經稀釋或體積更大的樣品。
8 ）. 壓碎、攪勻固體或半固體樣品，用水溶解提取。
9 ）. 用Carrez試劑將含有蛋白質的樣品去蛋白。
10）.含脂肪的樣品用熱水提取。
實驗通用規(guī)則：
1、洗液不夠時，可用蒸餾水自行配制PH7.4，0.02M的磷酸緩沖液，加入0.1%的吐溫20作為洗液。加入1/1000的疊氮鈉后可長期保存。
2、液體全部加完后，可將酶標板在桌子上平行輕輕晃動30秒，混勻液體。也可以用酶標儀的晃動功能。
3、底物有一定的毒性，終止液對皮膚有腐蝕性，應盡量避免接觸。
4、檢測前，要打開酶標儀，使之穩(wěn)定10分鐘以上。
5、吸取液體時，要用量程和需要量接近的槍去吸，減少誤差。
6、將液體加到酶標孔中時，避免槍頭和孔內液體接觸，可使槍頭上的液滴和孔壁接觸，液滴會自然流下去。
7、溫浴時，要用不干膠或膠帶紙封好酶標板，防止水分的蒸發(fā)。
8、洗板時，每次洗液加入后，應靜置1分鐘，使清洗更加徹底。沒有洗板機時，倒去液體后，要將酶標板在報紙或毛紙上用力拍干。
9、用槍吸取液體時速度不能太快，以免產生氣泡而使吸取量不準確。
10、底物是光敏感的，要在臨用前現(xiàn)配。
二苯基碘鎓六氟磷酸鹽(>97.0%(T)) Diphenyliodonium Hexafluorophosphate 58109-40-3 質量規(guī)格：>97.0%(T)  DNA探針地高辛聚合酶整合標記試劑盒 進口/國產 規(guī)格：10次

2-(4-甲氧苯基)-4,6-雙(三氯甲基) -1,3,5-三嗪(>98.0%(GC)) 2-(4-Methoxyphenyl)-4,6-bis(trichloromethyl)-1,3,5-triazine 3584-23-4 質量規(guī)格：>98.0%(GC)  隨機引物DNA探針地高辛聚合酶標記試劑盒 進口/國產 規(guī)格：10次

三苯基溴化锍(>98.0%(T)) Triphenylsulfonium Bromide 3353-89-7 質量規(guī)格：>98.0%(T)  PCR探針地高辛TAG聚合酶標記試劑盒 進口/國產 規(guī)格：10次

基[3-(三乙氧基硅基)丙基]氯化銨(>98.0%(T)) Trimethyl[3-(triethoxysilyl)propyl]ammonium Chloride 84901-27-9 質量規(guī)格：>98.0%(T)  3′端DNA地高辛轉移酶標記試劑盒 進口/國產 規(guī)格：10次

1-[3-(氧基硅基)丙基]脲(>94.0%(N)) 1-[3-(Trimethoxysilyl)propyl]urea 23843-64-3 質量規(guī)格：>94.0%(N)  RNA探針地高辛聚合酶標記試劑盒 進口/國產 規(guī)格：10次

芐?；鶡o色亞甲基蘭(>95.0%(HPLC)(T)) Benzoyl Leuco Methylene Blue 1249-97-4 質量規(guī)格：>95.0%(HPLC)(T)  3′端DNA生物素轉移酶標記試劑盒 進口/國產 規(guī)格：10次

結晶紫內酯(>95.0%(HPLC)(T)) Crystal Violet Lactone 1552-42-7 質量規(guī)格：>95.0%(HPLC)(T)  3′端DNA生物素轉移酶標記鑒定試劑盒 進口/國產 規(guī)格：10次

6'-(二乙氨基)-1',3'-二甲基熒烷(>98.0%(HPLC)(T)) 6'-(Diethylamino)-1',3'-dimethylfluoran 21934-68-9 質量規(guī)格：>98.0%(HPLC)(T)  生物素標記封閉溶液 進口/國產 規(guī)格：100毫升

6'-(二乙氨基)-1',2'-苯并熒烷(>98.0%(GC)(T)) 6'-(Diethylamino)-1',2'-benzofluoran 26628-47-7 質量規(guī)格：>98.0%(GC)(T)  10% TWEEN 20溶液 進口/國產 規(guī)格：100毫升

2'-(二芐氨基)-6'-(二乙氨基)熒烷(>98.0%(HPLC)(T)) 2'-(Dibenzylamino)-6'-(diethylamino)fluoran 34372-72-0 質量規(guī)格：>98.0%(HPLC)(T)  95% TWEEN 20溶液 進口/國產 規(guī)格：100毫升

3',6'-二甲氧基熒烷(>98.0%(HPLC)) 3',6'-Dimethoxyfluoran 36886-76-7 質量規(guī)格：>98.0%(HPLC)  10%TWEEN 80溶液 進口/國產 規(guī)格：100毫升

1,1'-亞甲基二-2-萘酚(>97.0%(GC)) 1,1'-Methylenedi-2-naphthol 1096-84-0 質量規(guī)格：>97.0%(GC)  10%Triton X-100溶液 進口/國產 規(guī)格：100毫升

2-萘基芐基醚(>98.0%(GC)) Benzyl 2-Naphthyl Ether 613-62-7 質量規(guī)格：>98.0%(GC)  10%Triton X-114溶液 進口/國產 規(guī)格：100毫升

己酰胺(>98.0%(N)) Hexanamide 628-02-4 質量規(guī)格：>98.0%(N)  10%NP-40溶液 進口/國產 規(guī)格：100毫升

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操作步驟(僅供參考)：  
1.配制65mM H2O2基液：本試劑盒提供的H2O2基液中的H2O2濃度約為1M。由于過 氧化氫不是非常穩(wěn)定，使用前需自行測定過氧化氫的實際濃度。把濃度約為1M的H2O2基液用本試劑盒提供的CAT Assay buffer稀釋100倍，使H2O2基液中的H2O2濃度約為10mM。
2.準備樣品：  
a,細胞或組織樣品：取恰當細胞或組織進行裂解，可以采用Leagene Western及IP 細胞裂解液，如果有必要需進行適當勻漿，低速離心取上清，-70℃凍存，用于CAT的檢測。  
b,血漿、血清和尿液樣品：血漿、血清按照常規(guī)方法制備，用生理鹽水10倍稀釋后， 可以直接用于本試劑盒的測定，尿液通常也可以直接用于測定，-70℃凍存，用于CAT的檢測。  
c,全血樣品：收集適量的全血(whole blood)至一抗凝管內，顛倒混勻。取100μl全 血凍融一次，用CAT Assay buffer1000倍后進行CAT檢測。
d,血液中的紅細胞裂解液：用抗凝管收集血液，顛倒混勻。取至少500μl全血4℃ 3000g離心5min，棄上清，沉淀用預冷的生理鹽水洗滌3次。  
e,高活性樣品：如果樣品中含有較高活性的CAT，可以使用CAT Assay buffer稀釋。
f,(選做)樣品準備完畢后可以用BCA蛋白濃度測定試劑盒測定蛋白濃度，以便于后續(xù) 計算單位蛋白重量組織或細胞內的CAT含量。  
3、 CAT檢測：按照下表設置空白管、自身對照管、測定管，溶液應按照順序依次加入，并 注意避免產生氣泡。如果樣品中的酶活性過高，可以減少樣品用量或適當稀釋后再進行測定。樣品的檢測能設置平行孔。
4、分光光度計檢測405nm處吸光度，分光光度計比色杯光徑0.5cm。如果沒有分光光度計，亦可用酶標儀檢測，但如果有條件，盡量采用分光光度計檢測。蒸餾水調零，讀取各管吸光度值。一般應數小時內檢測完畢。

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