操作步驟(僅供參考):
1.配制65mM H2O2基液:本試劑盒提供的H2O2基液中的H2O2濃度約為1M。由于過(guò) 氧化氫不是非常穩(wěn)定,使用前需自行測(cè)定過(guò)氧化氫的實(shí)際濃度。把濃度約為1M的H2O2基液用本試劑盒提供的CAT Assay buffer稀釋100倍,使H2O2基液中的H2O2濃度約為10mM。
2.準(zhǔn)備樣品:
a,細(xì)胞或組織樣品:取恰當(dāng)細(xì)胞或組織進(jìn)行裂解,可以采用Leagene Western及IP 細(xì)胞裂解液,如果有必要需進(jìn)行適當(dāng)勻漿,低速離心取上清,-70℃凍存,用于CAT的檢測(cè)。
b,血漿、血清和尿液樣品:血漿、血清按照常規(guī)方法制備,用生理鹽水10倍稀釋后, 可以直接用于本試劑盒的測(cè)定,尿液通常也可以直接用于測(cè)定,-70℃凍存,用于CAT的檢測(cè)。
c,全血樣品:收集適量的全血(whole blood)至一抗凝管內(nèi),顛倒混勻。取100μl全 血凍融一次,用CAT Assay buffer1000倍后進(jìn)行CAT檢測(cè)。
d,血液中的紅細(xì)胞裂解液:用抗凝管收集血液,顛倒混勻。取至少500μl全血4℃ 3000g離心5min,棄上清,沉淀用預(yù)冷的生理鹽水洗滌3次。
e,高活性樣品:如果樣品中含有較高活性的CAT,可以使用CAT Assay buffer稀釋。
f,(選做)樣品準(zhǔn)備完畢后可以用BCA蛋白濃度測(cè)定試劑盒測(cè)定蛋白濃度,以便于后續(xù) 計(jì)算單位蛋白重量組織或細(xì)胞內(nèi)的CAT含量。
3、 CAT檢測(cè):按照下表設(shè)置空白管、自身對(duì)照管、測(cè)定管,溶液應(yīng)按照順序依次加入,并 注意避免產(chǎn)生氣泡。如果樣品中的酶活性過(guò)高,可以減少樣品用量或適當(dāng)稀釋后再進(jìn)行測(cè)定。樣品的檢測(cè)能設(shè)置平行孔。
4、分光光度計(jì)檢測(cè)405nm處吸光度,分光光度計(jì)比色杯光徑0.5cm。如果沒(méi)有分光光度計(jì),亦可用酶標(biāo)儀檢測(cè),但如果有條件,盡量采用分光光度計(jì)檢測(cè)。蒸餾水調(diào)零,讀取各管吸光度值。一般應(yīng)數(shù)小時(shí)內(nèi)檢測(cè)完畢。
【友情提示】:本產(chǎn)品僅供科研研究使用,不得用于臨床直接檢測(cè)。避免給您帶來(lái)不必要的損失,請(qǐng)仔細(xì)閱讀購(gòu)買(mǎi)說(shuō)明!
產(chǎn)品名稱(chēng):p53 (Ab-315) Antibody
規(guī)格:詳見(jiàn)說(shuō)明
測(cè)試方法:詳見(jiàn)說(shuō)明
客戶自備儀器和試劑:
紫外分光光度計(jì)、臺(tái)式離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)式移液器、1 mL石英比色皿和蒸餾水。
特點(diǎn):
1、優(yōu)化設(shè)計(jì)的實(shí)驗(yàn)方案,1小時(shí)即可完成
2、靈敏度高,操作便捷
3、試劑盒提供檢測(cè)果糖所需的全套試劑
常見(jiàn)樣本處理方法:
1、血清(漿)樣品:直接檢測(cè)。
2、組織:按照組織質(zhì)量(g) :提取液體積(mL)為 1:5~10 的比例(建議稱(chēng)取約 0.1g組織,
加入 1mL提取液),進(jìn)行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10min,取上清,置冰上待測(cè)。
樣品制備:
1). 直接或稀釋使用清亮無(wú)色中性液體樣品,體積可達(dá)2.000ml。
2). 過(guò)濾混濁溶液。
3). 除去樣品中的CO 2 (果糖含量測(cè)試盒說(shuō)明書(shū)過(guò)過(guò)濾)。
4 ). 果糖含量測(cè)試盒說(shuō)明書(shū)過(guò)加氫氧化鉀或氫氧化鈉將酸性樣品的PH值調(diào)至8.0。
5 ). 調(diào)整酸性淺色樣品的PH值至8.0,孵育約15分鐘。
6 ). 用空白樣品做對(duì)照測(cè)定有色樣品(如有必要調(diào)整PH值至8.0)。
7 ). 用PVPP( 聚乙烯吡咯烷酮)或聚酰胺處理深色未經(jīng)稀釋或體積更大的樣品。
8 ). 壓碎、攪勻固體或半固體樣品,用水溶解提取。
9 ). 用Carrez試劑將含有蛋白質(zhì)的樣品去蛋白。
10).含脂肪的樣品用熱水提取。
實(shí)驗(yàn)通用規(guī)則:
1、洗液不夠時(shí),可用蒸餾水自行配制PH7.4,0.02M的磷酸緩沖液,加入0.1%的吐溫20作為洗液。加入1/1000的疊氮鈉后可長(zhǎng)期保存。
2、液體全部加完后,可將酶標(biāo)板在桌子上平行輕輕晃動(dòng)30秒,混勻液體。也可以用酶標(biāo)儀的晃動(dòng)功能。
3、底物有一定的毒性,終止液對(duì)皮膚有腐蝕性,應(yīng)盡量避免接觸。
4、檢測(cè)前,要打開(kāi)酶標(biāo)儀,使之穩(wěn)定10分鐘以上。
5、吸取液體時(shí),要用量程和需要量接近的槍去吸,減少誤差。
6、將液體加到酶標(biāo)孔中時(shí),避免槍頭和孔內(nèi)液體接觸,可使槍頭上的液滴和孔壁接觸,液滴會(huì)自然流下去。
7、溫浴時(shí),要用不干膠或膠帶紙封好酶標(biāo)板,防止水分的蒸發(fā)。
8、洗板時(shí),每次洗液加入后,應(yīng)靜置1分鐘,使清洗更加徹底。沒(méi)有洗板機(jī)時(shí),倒去液體后,要將酶標(biāo)板在報(bào)紙或毛紙上用力拍干。
9、用槍吸取液體時(shí)速度不能太快,以免產(chǎn)生氣泡而使吸取量不準(zhǔn)確。
10、底物是光敏感的,要在臨用前現(xiàn)配。
成骨特異性轉(zhuǎn)錄因子(多肽)CBFA1/RUNX2 (Runt-related Transcription Factor 2) 0.5mg
酪氨酸酶(多肽抗原)Tyrosinase 0.5mg
植物維生素D3Plant Vitamin D3,VD3 ELISA kit 96T
大鼠γ氨基丁酸GABA ELISA Kit 96T
癌胚抗原定量 CEA 96T
脫氧輔合酶蛋白抗體英文名稱(chēng):DHPS 0.2ml 腺苷酸環(huán)化酶關(guān)聯(lián)蛋白2(CAP2)ELISA試劑盒 CAP2 ELISA Kit
真核啟動(dòng)因子2α抗體(eIFα2)英文名稱(chēng):eIF2 alpha 0.2ml 肉毒堿棕櫚酰基轉(zhuǎn)移酶1B(CPT1B)ELISA試劑盒 CPT1B ELISA Kit
?;撬?/span>/β-氨基乙磺酸抗體英文名稱(chēng):Gibberellins 0.1ml 激肽原1(KNG1)ELISA試劑盒 KNG1 ELISA Kit
干擾素α10抗體英文名稱(chēng):IFNA10 0.2ml 白細(xì)胞 球蛋白樣受體亞家族A成員3(LILRA3)ELISA試劑盒 LILRA3 ELISA Kit
絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶31抗體英文名稱(chēng):STK31 0.2ml
Smad核轉(zhuǎn)錄共抑制因子抗體英文名稱(chēng):SnoN 0.2ml
Alexa Fluor 647標(biāo)記的小鼠抗大鼠IgGMouse Anti-rat IgG/Alexa Fluor 647 0.1ml
配對(duì)盒基因8抗原PAX8(Paired box gene 8) 0.5mg
成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子受體2抗原FGFR2(Fibroblast Growth Factor Receptor 2) 0.5mg
壬基酚抗體英文名稱(chēng):Nonylphenol 1ml
19號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框50抗體英文名稱(chēng):C19orf50 0.1ml 骨形成蛋白15(BMP15)ELISA試劑盒 BMP15 ELISA Kit
p53 (Ab-315) Antibody李斯特氏選擇添加劑 DNA 電泳分子量標(biāo)準(zhǔn) (3)λ/EcoR I+ Hind III50 次
APT agar APT瓊脂 1.10453.0500MERCK默克 DNA 電泳分子量標(biāo)準(zhǔn) (3)pBR322/BstN I50 次
YM11瓊脂基礎(chǔ) 250(g) DNA 電泳分子量標(biāo)準(zhǔn) (3)φX174 DNA/Hae Ⅲ50 次
葡萄糖銨培養(yǎng)基 250(g) DNA 電泳分子量標(biāo)準(zhǔn) (3)φX174 DNA/Hinc Ⅱ50 次
疊氮鈉葡萄糖肉湯 250(g) Southern 專(zhuān)用 DNA Marker( 生物素 )20 次
植物(大豆)蛋白胨 200培養(yǎng)基原材料,含碳水化合物,提供細(xì)生長(zhǎng)氮源 Southern 專(zhuān)用 DNA Marker(DIG)20 次
酚紅煌綠瓊脂 250(g) Southern Marker DL2000( 生物素 )20 次
TTC瓊脂基礎(chǔ) 250(g) Southern Marker DL2000(DIG)20 次
D/E中和瓊脂 250(g) Southern Marker Oligo(DIG)20 次
蔗糖胰蛋白胨肉湯 250(g) Southern Marker Oligo( 生物素 )20 次
Dnase test agar DNA酶測(cè)試瓊脂 1.10449.0501MERCK默克 大片段 DNA 分子量標(biāo)準(zhǔn)50μg
李斯特顯色培養(yǎng)基 1000 mL/瓶 脈沖電泳 Marker( 酵母染色體 PFG)50 次
脫脂奶蔗糖胰蛋白胨瓊脂培養(yǎng)基 250(g) 脈沖電泳 Marker(Lambda LadderPFG)50 次
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