操作步驟(僅供參考):
1.配制65mM H2O2基液:本試劑盒提供的H2O2基液中的H2O2濃度約為1M。由于過 氧化氫不是非常穩(wěn)定,使用前需自行測定過氧化氫的實(shí)際濃度。把濃度約為1M的H2O2基液用本試劑盒提供的CAT Assay buffer稀釋100倍,使H2O2基液中的H2O2濃度約為10mM。
2.準(zhǔn)備樣品:
a,細(xì)胞或組織樣品:取恰當(dāng)細(xì)胞或組織進(jìn)行裂解,可以采用Leagene Western及IP 細(xì)胞裂解液,如果有必要需進(jìn)行適當(dāng)勻漿,低速離心取上清,-70℃凍存,用于CAT的檢測。
b,血漿、血清和尿液樣品:血漿、血清按照常規(guī)方法制備,用生理鹽水10倍稀釋后, 可以直接用于本試劑盒的測定,尿液通常也可以直接用于測定,-70℃凍存,用于CAT的檢測。
c,全血樣品:收集適量的全血(whole blood)至一抗凝管內(nèi),顛倒混勻。取100μl全 血凍融一次,用CAT Assay buffer1000倍后進(jìn)行CAT檢測。
d,血液中的紅細(xì)胞裂解液:用抗凝管收集血液,顛倒混勻。取至少500μl全血4℃ 3000g離心5min,棄上清,沉淀用預(yù)冷的生理鹽水洗滌3次。
e,高活性樣品:如果樣品中含有較高活性的CAT,可以使用CAT Assay buffer稀釋。
f,(選做)樣品準(zhǔn)備完畢后可以用BCA蛋白濃度測定試劑盒測定蛋白濃度,以便于后續(xù) 計(jì)算單位蛋白重量組織或細(xì)胞內(nèi)的CAT含量。
3、 CAT檢測:按照下表設(shè)置空白管、自身對照管、測定管,溶液應(yīng)按照順序依次加入,并 注意避免產(chǎn)生氣泡。如果樣品中的酶活性過高,可以減少樣品用量或適當(dāng)稀釋后再進(jìn)行測定。樣品的檢測能設(shè)置平行孔。
4、分光光度計(jì)檢測405nm處吸光度,分光光度計(jì)比色杯光徑0.5cm。如果沒有分光光度計(jì),亦可用酶標(biāo)儀檢測,但如果有條件,盡量采用分光光度計(jì)檢測。蒸餾水調(diào)零,讀取各管吸光度值。一般應(yīng)數(shù)小時(shí)內(nèi)檢測完畢。
【友情提示】:本產(chǎn)品僅供科研研究使用,不得用于臨床直接檢測。避免給您帶來不必要的損失,請仔細(xì)閱讀購買說明!
產(chǎn)品名稱:PLC-γ2 (phospho-Tyr1217) Antibody
規(guī)格:詳見說明
測試方法:詳見說明
客戶自備儀器和試劑:
紫外分光光度計(jì)、臺式離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)式移液器、1 mL石英比色皿和蒸餾水。
特點(diǎn):
1、優(yōu)化設(shè)計(jì)的實(shí)驗(yàn)方案,1小時(shí)即可完成
2、靈敏度高,操作便捷
3、試劑盒提供檢測果糖所需的全套試劑
常見樣本處理方法:
1、血清(漿)樣品:直接檢測。
2、組織:按照組織質(zhì)量(g) :提取液體積(mL)為 1:5~10 的比例(建議稱取約 0.1g組織,
加入 1mL提取液),進(jìn)行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10min,取上清,置冰上待測。
樣品制備:
1). 直接或稀釋使用清亮無色中性液體樣品,體積可達(dá)2.000ml。
2). 過濾混濁溶液。
3). 除去樣品中的CO 2 (果糖含量測試盒說明書過過濾)。
4 ). 果糖含量測試盒說明書過加氫氧化鉀或氫氧化鈉將酸性樣品的PH值調(diào)至8.0。
5 ). 調(diào)整酸性淺色樣品的PH值至8.0,孵育約15分鐘。
6 ). 用空白樣品做對照測定有色樣品(如有必要調(diào)整PH值至8.0)。
7 ). 用PVPP( 聚乙烯吡咯烷酮)或聚酰胺處理深色未經(jīng)稀釋或體積更大的樣品。
8 ). 壓碎、攪勻固體或半固體樣品,用水溶解提取。
9 ). 用Carrez試劑將含有蛋白質(zhì)的樣品去蛋白。
10).含脂肪的樣品用熱水提取。
實(shí)驗(yàn)通用規(guī)則:
1、洗液不夠時(shí),可用蒸餾水自行配制PH7.4,0.02M的磷酸緩沖液,加入0.1%的吐溫20作為洗液。加入1/1000的疊氮鈉后可長期保存。
2、液體全部加完后,可將酶標(biāo)板在桌子上平行輕輕晃動(dòng)30秒,混勻液體。也可以用酶標(biāo)儀的晃動(dòng)功能。
3、底物有一定的毒性,終止液對皮膚有腐蝕性,應(yīng)盡量避免接觸。
4、檢測前,要打開酶標(biāo)儀,使之穩(wěn)定10分鐘以上。
5、吸取液體時(shí),要用量程和需要量接近的槍去吸,減少誤差。
6、將液體加到酶標(biāo)孔中時(shí),避免槍頭和孔內(nèi)液體接觸,可使槍頭上的液滴和孔壁接觸,液滴會自然流下去。
7、溫浴時(shí),要用不干膠或膠帶紙封好酶標(biāo)板,防止水分的蒸發(fā)。
8、洗板時(shí),每次洗液加入后,應(yīng)靜置1分鐘,使清洗更加徹底。沒有洗板機(jī)時(shí),倒去液體后,要將酶標(biāo)板在報(bào)紙或毛紙上用力拍干。
9、用槍吸取液體時(shí)速度不能太快,以免產(chǎn)生氣泡而使吸取量不準(zhǔn)確。
10、底物是光敏感的,要在臨用前現(xiàn)配。
Alexa Fluor 350標(biāo)記的驢抗人IgGDonkey Anti-human IgG/Alexa Fluor 350 0.1ml
腫瘤壞死因子-β抗原TNF- Beta(Tumor Necrosis Factor- Beta) 0.5mg
羅丹明標(biāo)記牛血清白蛋白BSA/RBITC 0.3ml
小鼠CD8分子CD8(Rat Troponin T) ELISA Kit 96T
人αL巖藻糖苷酶AFU(Human alpha-L-fucosidase) ELISA Kit 96T
碳水化合物磺基轉(zhuǎn)移酶14抗體英文名稱:CHST14 0.1ml 信號傳導(dǎo)轉(zhuǎn)錄激活因子1(STAT1)ELISA試劑盒 STAT1 ELISA Kit
唐氏綜合征細(xì)胞粘附分子抗體英文名稱:Dscam 0.2ml 通用轉(zhuǎn)錄因子ⅡE肽1(GTF2E1)ELISA試劑盒 GTF2E1 ELISA Kit
范可尼貧血相關(guān)蛋白M抗體英文名稱:FANCM 0.2ml 膜聯(lián)蛋白A4(ANXA4)ELISA試劑盒 ANXA4 ELISA Kit
橋尾蛋白抗體英文名稱:Gephyrin 0.1ml 骨形成蛋白1(BMP1)ELISA試劑盒 BMP1 ELISA Kit
人鞭毛蛋白Human flagellin ELISA Kit 96T
濕疹血小板減少伴 缺陷綜合征相關(guān)蛋白抗體英文名稱:WASP 0.1ml
兔抗雞IgMRabbit Anti-chicken IgM 0.2ml
膠體金標(biāo)記的兔抗小鼠IgMRabbit Anti-mouse IgM/Gold 0.5ml
肝臟型脂肪酸結(jié)合蛋白抗原LFABP/FABP-1(Liver Fatty acid binding protein) 0.5mg
酰基輔酶A脫氫酶長鏈抗體英文名稱:ACADL 0.1ml 心鈉肽(ANP)ELISA試劑盒 ANP ELISA Kit
鋅指蛋白851抗體英文名稱:BTBD15 0.2ml 可溶性凝集素樣氧化低密度脂蛋白受體1(sLOX-1)ELISA試劑盒 sLOX-1 ELISA Kit
PLC-γ2 (phospho-Tyr1217) Antibody胰蛋白大豆肉湯 用于菌落計(jì)數(shù)以及培養(yǎng)苛養(yǎng)和非苛養(yǎng)菌500g Winogradskyella ulvae 凍干粉
GVPC瓊脂基礎(chǔ) 100(g) Winogradskyella thalassocola 凍干粉
EC Broth EC肉湯 1.10765.0502MERCK默克 Winogradskyella eximia 凍干粉
沙保氏麥芽糖瓊脂 (CM0041a) Oxoid Winogradskyella eckloniae 凍干粉
蔗糖胰蛋白胨肉湯 250(g) Winogradskyella echinorum 凍干粉
煌綠肉湯增菌液基礎(chǔ) 250(g) Winogradskyella damuponensis 凍干粉
DNA酶甲基綠瓊脂基礎(chǔ) 100(g) Gillisia mitskevichiae 凍干粉
半固體動(dòng)力培養(yǎng)基 250(g) Aurantimonas litoralis 凍干粉
膽鹽乳糖發(fā)酵培養(yǎng)基 250(g) 緩癥鏈球菌 凍干粉
液體沙氏培養(yǎng)基 250(g) 珊瑚球菌 凍干粉
氯化鎂孔雀綠肉湯(MM/RV/R10) 250(g) 彭氏變形桿菌 凍干粉
MUELLER-HINTON agar MUELLER-HINTON 瓊脂 1.05437.0500MERCK默克 肺炎克雷伯氏菌鼻硬結(jié)亞種 凍干粉
弗雷澤李斯特菌選擇富集肉湯(基礎(chǔ)) 新鞘脂菌屬 凍干粉
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