復(fù)蘇細(xì)胞收集處理

1、請(qǐng)按照說(shuō)明書(shū)提前準(zhǔn)備好基礎(chǔ)培養(yǎng)基、血清、因子、胰酶、雙抗，不要隨意更改培養(yǎng)條件，提前將生物安 全柜進(jìn)行酒精消 毒和紫外滅 菌。

2、 收到細(xì)胞后，若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、漏液、培養(yǎng)基渾濁或污染，請(qǐng)拍照后及時(shí)聯(lián)系我們。

3、 細(xì)胞在37℃培養(yǎng)箱中靜置2-3小時(shí)，在倒置顯微鏡下確認(rèn)細(xì)胞狀態(tài)，給細(xì)胞（100倍×2張，200倍×2張）以及培養(yǎng)瓶（外觀×1張）拍照留存，售后時(shí)肯定需要提供。

4、 瓶?jī)?nèi)充液培養(yǎng)基（運(yùn)輸培養(yǎng)基）不能再用來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞，需按照說(shuō)明書(shū)上的培養(yǎng)條件配制新鮮完全培養(yǎng)基培養(yǎng)細(xì)胞。

5、鏡下觀察細(xì)胞的生長(zhǎng)密度若在60%以下，收集全部充液培養(yǎng)基，250g離心5分鐘，棄去培養(yǎng)瓶中充液培養(yǎng)基，用新鮮配制的完全培養(yǎng)基重懸未貼壁的細(xì)胞，將細(xì)胞鋪瓶至新的T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶，補(bǔ)齊完全培養(yǎng)基至6mL，放到細(xì)胞培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。若細(xì)胞生長(zhǎng)密度達(dá)70%-80%以上，立刻對(duì)細(xì)胞進(jìn)行傳代處理。

注：在快遞運(yùn)送過(guò)程中細(xì)胞因振動(dòng)會(huì)造成脫落現(xiàn)象，不論繼續(xù)培養(yǎng)還是傳代，未貼壁的細(xì)胞均需離心回收。

6、收到細(xì)胞后第1次傳代建議T25培養(yǎng)瓶1:2傳代 ，保種1支，另外1支傳代至T25新瓶，前3代建議均采用1:2傳代，若細(xì)胞明顯達(dá)到對(duì)數(shù)期，1:2傳代后第2天就長(zhǎng)滿，則可提高傳代比例，采用1:3傳代，前面代次建議代代保種，以妨出現(xiàn)問(wèn)題后無(wú)種可用。

7、 由于細(xì)胞在運(yùn)輸過(guò)程中失去原有適宜的生長(zhǎng)條件且長(zhǎng)時(shí)間顛簸，收到細(xì)胞進(jìn)行傳代后，建議前3-5代培養(yǎng)條件可適當(dāng)提高血清含量以促進(jìn)恢復(fù)細(xì)胞原有狀態(tài)并縮短到達(dá)對(duì)數(shù)期的時(shí)間。

8、 市面上血清魚(yú)龍混雜，假血清（BSA或替代物冒充血清）、劣質(zhì)血清（小牛冒充胎牛）、水貨（國(guó)產(chǎn)冒充進(jìn)口）屢見(jiàn)不鮮，若客戶培養(yǎng)細(xì)胞過(guò)程中明顯感覺(jué)細(xì)胞生長(zhǎng)速度不及預(yù)期，且無(wú)法更換血清，建議酌情提高血清含量來(lái)彌補(bǔ) 血清質(zhì)量的缺陷，以期提高細(xì)胞生長(zhǎng)速度。

9、實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，將臺(tái)子內(nèi)的細(xì)胞放回培養(yǎng)箱，試劑放回冰箱，后噴灑Deeming實(shí)驗(yàn)室安 全衛(wèi)士，預(yù)防微生物污染，關(guān)閉生物安 全柜，打開(kāi)紫外滅 菌30分鐘以上。