細胞傳代問題解答：

1、傳代密度過高

一旦細胞養(yǎng)太久至融合度過高(>90%)才傳代，容易使細胞產(chǎn)生老化現(xiàn)象，甚至是堆疊，再消化細胞時不易吹打成單顆細胞，即便再重新鋪盤傳代，細胞也無法回到原本的特性了。(如：單層細胞，沒長滿就發(fā)生堆疊現(xiàn)象)。

解決方案：

盡量避免融合度過高，鏡下觀察融合度約達到80%即可傳代分盤。

細胞融合度：在細胞培養(yǎng)中指的是細胞在培養(yǎng)表面(培養(yǎng)皿/瓶)所占的比例。

2、傳代密度過低

哺乳動物貼壁培養(yǎng)細胞，若細胞培養(yǎng)到80-90%密度需要開始傳代，在傳代接種細胞密度過低，細胞間距離太遠，就無法在細胞間產(chǎn)生黏附及通信作用，幫助信號傳導(dǎo)并活化細胞；總體細胞量不足，分泌的生長因子濃度會不足以產(chǎn)生利于生長的微環(huán)境，以上皆會造成增殖速度遲緩或細胞死亡。

解決方案：

細胞傳代時，要進行準確的細胞計數(shù)，確保鋪盤的密度。

3、凍 存

細胞凍存的基本原理：慢凍

手動降溫：將細胞依序放在4℃(30分鐘)、-20℃(1小時)、-80℃(過夜)后移至液氮中保存。

程序降溫盒：是一般廣泛使用的降溫法，為一種特制冷凍容器(填充異丙醇或依靠特制金屬導(dǎo)熱)，使細胞以每分鐘約-1℃的速度降至-80℃(過夜)，然后移至液氮中保存。

由此可以看出，程序降溫精準度更高，優(yōu)于手動降溫。

部分低溫保護劑在緩慢冷凍過程中雖然會保護細胞，但它們也會引起細胞毒性，尤其是在室溫下。因此，在標準的自制凍存液中，會含有血清，血清是用來降低細胞毒性的，但血清也不是完整的。