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ELISA間接法測(cè)抗體操作步驟

間接法是檢測(cè)抗體 zui 常用的方法,其原理為利用酶標(biāo)記的抗抗體以檢測(cè)已與固相結(jié)合的受檢抗體,故稱為間接法。操作步驟如下:


1、將特異性抗原與固相載體連接,形成固相抗原:洗滌除去未結(jié)合的抗原及雜質(zhì)。


2、加稀釋的受檢血清:其中的特異抗體與抗原結(jié)合,形成固相抗原抗體復(fù)合物。經(jīng)洗滌后,固相載體上只留下特異性抗體。其他免yi球蛋白及血清中的雜質(zhì)由于不能與固相抗原結(jié)合,在洗滌過程中被洗去。


3、加酶標(biāo)抗抗體:與固相復(fù)合物中的抗體結(jié)合,從而使該抗體間接地標(biāo)記上酶。洗滌后,固相載體上的酶量就代表特異性抗體的量。例如欲測(cè)人對(duì)某種ji 病的抗體,可用酶標(biāo)羊抗人IgG抗體。


4、加底物顯色:顏色深度代表標(biāo)本中受檢抗體的量。


本法只要更換不同的固相抗原,可以用一種酶標(biāo)抗抗體檢測(cè)各種與抗原相應(yīng)的抗體。