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選定ELISA類型確定向?qū)?/h1>

ELISA技術(shù)可用于測(cè)定抗原,也可用于測(cè)定抗體。


ELISA方法中有三個(gè)必要的試劑:


(1) 固相的抗原或抗體,即"免yi吸附劑"(immunosorbent);


(2) 酶標(biāo)記的抗原或抗體,稱為"結(jié)合物"(conjugate);


(3) 酶反應(yīng)的底物。


一般可將ELISA分為以下幾種類型,實(shí)驗(yàn)先需要根據(jù)自己的待檢物來(lái)確定試劑盒類型。


1) 雙抗體夾心法:針對(duì)抗原分子上兩個(gè)不同抗原決定簇的單克隆抗體分別作為固相捕獲抗體和酶標(biāo)檢測(cè)抗體。適用于測(cè)定二價(jià)或二價(jià)以上的大分子抗原如血漿中的細(xì)胞因子,不適用于測(cè)定半抗原及小分子單價(jià)抗原。同理,也有雙抗原夾心法測(cè)抗體。


2) 直接法:將抗原直接固定在固相載體上,加入酶標(biāo)記的一抗,即可測(cè)定抗原總量。此法操作手續(xù)簡(jiǎn)短,因無(wú)須使用二抗可避免交互反應(yīng)。


3) 間接法:間接法是檢測(cè)抗體常用的方法,其原理為利用酶標(biāo)記的抗抗體(抗人免yi 球蛋白抗體)來(lái)檢測(cè)與固相抗原結(jié)合的待檢抗體。


4) 競(jìng)爭(zhēng)法:小分子抗原或半抗原因缺乏可作夾心法的兩個(gè)以上的位點(diǎn),因此不能用雙抗體夾心法進(jìn)行測(cè)定,可以采用競(jìng)爭(zhēng)法模式。當(dāng)抗原材料中的干擾物質(zhì)不易除去,或不易得到足夠的純化抗原時(shí),可用此法檢測(cè)特異性抗體。