細胞提取液反復(fù)凍融過程：

1、 吸出培養(yǎng)板中的培養(yǎng)基，用胰蛋白酶消化細胞，然后加入適量的培養(yǎng)基將培養(yǎng)板上的細胞沖洗干凈。懸浮細胞可以省略該步驟。

2、 將細胞懸浮液收集到離心管中，在2-8℃下以1000×g離心5分鐘，然后吸去培養(yǎng)基，用預(yù)冷PBS洗滌細胞3次。

3、 加入適量的預(yù)冷PBS（建議在使用前立即加入蛋白酶抑制劑）重懸細胞。在6孔培養(yǎng)板（約1×106個細胞）中，每個孔加入150-250μL的PBS來重懸細胞。

4、 使樣本在-20℃或-80℃條件和室溫條件下反復(fù)凍融，重復(fù)凍融過程數(shù)次，直至細胞*裂解。也可以使用超聲波細胞破碎器超聲處理懸浮液來裂解細胞。

5、 2-8℃下以1500×g離心10分鐘，去除細胞碎片，收集上清液，-20℃或-80℃保存，避免反復(fù)凍融。