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激光掃描多光子顯微鏡的改進(jìn)優(yōu)勢(shì)

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       激光掃描多光子顯微鏡 的改進(jìn)優(yōu)勢(shì)
     激光掃描多光子顯微鏡 是光學(xué)顯微鏡的重大改進(jìn),主要表現(xiàn)為可以觀察活細(xì)胞、固定細(xì)胞和組織的深層結(jié)構(gòu),并且可以得到清晰銳利的多層Z平面結(jié)構(gòu),即光學(xué)切片,并以此可以構(gòu)建出標(biāo)本的三維實(shí)體結(jié)構(gòu)。共聚焦顯微鏡是采用激光光源,經(jīng)過(guò)擴(kuò)充后充滿整個(gè)物鏡后焦平面,然后經(jīng)過(guò)物鏡的透鏡系統(tǒng),在標(biāo)本的焦平面上會(huì)聚成非常小的點(diǎn)。根據(jù)物鏡數(shù)值孔徑不同,*亮照明點(diǎn)直徑大小約0.25 ~ 0.8μm,深度約0.5 ~ 1.5μm。共聚焦點(diǎn)大小決定于顯微鏡設(shè)計(jì)、激光波長(zhǎng)、物鏡特性、掃描單元狀態(tài)設(shè)定和標(biāo)本性質(zhì)。場(chǎng)式顯微鏡的照明范圍和照明深度都很大,而共聚焦顯微鏡的照明則集中到焦平面上的一個(gè)**的焦點(diǎn)上。共聚焦顯微鏡*基本的優(yōu)點(diǎn)是可以對(duì)厚熒光標(biāo)本(可以達(dá)到50 μm或以上)進(jìn)行精細(xì)的光學(xué)切片,切片的厚度約為0.5到1.5μm。系列光學(xué)切片圖像可以通過(guò)**的顯微鏡Z軸步進(jìn)馬達(dá)上下移動(dòng)標(biāo)本獲得。圖像信息的采集被控制在**的平面內(nèi),而不會(huì)被位于標(biāo)本上其他位置發(fā)出的信號(hào)干擾。在去除背景熒光影響和增加信噪比后,共聚焦圖像的對(duì)比度和分辨率比傳統(tǒng)場(chǎng)式照明熒光圖像有明顯的提高。在很多標(biāo)本中,許多錯(cuò)綜的結(jié)構(gòu)成分相互交織構(gòu)成復(fù)雜的系統(tǒng),但是一旦能夠采集到足夠的光學(xué)切片,我們就能通過(guò)軟件對(duì)其進(jìn)行三維重建。這種實(shí)驗(yàn)方法已經(jīng)被廣泛應(yīng)用于生物學(xué)研究中,用來(lái)闡明細(xì)胞或組織之間復(fù)雜的結(jié)構(gòu)和功能關(guān)系。