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動物細(xì)胞培養(yǎng)基本技術(shù)及理論基礎(chǔ)

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點擊量: 200821 來源: 上海拜力生物科技有限公司
 細(xì)胞培養(yǎng)的基本方法 
1.組織、細(xì)胞的解離方法
1.1 解離組織:在無菌情況下采取動物的組織或器官,放在含有***的平衡鹽溶液(BSS)中,然后盡快在超凈臺或無菌室內(nèi)進(jìn)行解離處理。
解離時應(yīng)注意:
1) 盡可能將脂肪和壞死組織去除干凈;
2) 剪碎組織時,避免損傷組織塊;
3) 解離組織用的各種酶系,需要先進(jìn)行低速離心。
解離細(xì)胞
常用酶和鰲合劑進(jìn)行解離:
當(dāng)實驗室需要制備具有均勻細(xì)胞層的培養(yǎng)物;
從單個細(xì)胞出發(fā)獲得細(xì)胞群體;
從一定量的組織中獲得*多的細(xì)胞量時。
解離細(xì)胞的方法
1)胰蛋白酶解離細(xì)胞法:所需時間較短,主要缺點是破損細(xì)胞。
2)膠原酶解離細(xì)胞法:這種方法對解離胚胎性、正常和惡性組織是很有效的。膠原酶*終濃度200u/ml,36.5℃溫育,一般溫育4-48h。膠原酶和透明質(zhì)酸酶協(xié)同作用有助于分離大鼠或兔的肝臟組織。
3)機(jī)械解離細(xì)胞法:比酶法所需時間短,但細(xì)胞存活率較低。
4)螯合劑解離細(xì)胞法:分離效果差
原代細(xì)胞培養(yǎng) 
1)外植塊培養(yǎng):外植塊在一定限度內(nèi)可保持其原有組織結(jié)構(gòu),有利于其適應(yīng)體外培養(yǎng)環(huán)境。短期培養(yǎng)的外植塊成為細(xì)胞培養(yǎng)的材料來源之一。
2)單層細(xì)胞培養(yǎng):每隔1~3d換液一次,細(xì)胞長成單層后傳代培養(yǎng)。
3)懸浮細(xì)胞培養(yǎng):使細(xì)胞成懸浮狀態(tài)在培養(yǎng)液中連續(xù)生長。
由于細(xì)胞本身是不粘附的,如小鼠白血病細(xì)胞和腹水腫瘤細(xì)胞;
通過機(jī)械攪動使細(xì)胞保持懸浮狀態(tài);
通過選擇培養(yǎng)得到能懸浮生長的細(xì)胞進(jìn)行懸浮培養(yǎng)。
細(xì)胞培養(yǎng)中應(yīng)注意的幾個問題 
1)培養(yǎng)液和培養(yǎng)物的比例:一定濃度的培養(yǎng)液僅能支持一定數(shù)量的細(xì)胞生長,不能盲目增加每單位體積的細(xì)胞濃度。
2)PH:初培養(yǎng)pH應(yīng)為7.4,培養(yǎng)過程應(yīng)不低于7.0。
3)培養(yǎng)瓶內(nèi)的空間:一般培養(yǎng)瓶內(nèi)培養(yǎng)液與液面上的空間體積之比為1:10。    
4)容積、深度、表面面積:培養(yǎng)液體積與表面面積的比例為0.2~0.5ml/cm2。需高濃度氧的,在淺的培養(yǎng)液(2mm)中生長較好;需要低濃度氧的。在深的培養(yǎng)液(5mm)中生長較好。
5)去除死細(xì)胞
6)溫度控制:動物細(xì)胞培養(yǎng)對溫度波動的敏感性很大。溫度低于36.5℃,細(xì)胞生長緩慢;溫度高于37.5℃,細(xì)胞存活力降低。


動物細(xì)胞培養(yǎng)是模擬體內(nèi)生理條件在體外對細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng),使之生存和生長的一種技術(shù)手段。
動物細(xì)胞培養(yǎng)(animal cell culture)就是從動物機(jī)體中取出相關(guān)的組織,將它分散成單個細(xì)胞(使用胰蛋白酶或膠原蛋白酶)然后,放在適宜的培養(yǎng)基中,讓這些細(xì)胞生長和增殖。
細(xì)胞培養(yǎng)是指細(xì)胞在體外條件下的生長,動物細(xì)胞在單獨細(xì)胞培養(yǎng)的過程中不再形成個體。
細(xì)胞的全能性不是動物細(xì)胞培養(yǎng)的基礎(chǔ),細(xì)胞的全能性是植物細(xì)胞培養(yǎng)的理論基礎(chǔ)。而動物細(xì)胞培養(yǎng)的理論基礎(chǔ)是細(xì)胞增殖。動物細(xì)胞培養(yǎng)基本技術(shù)及理論基礎(chǔ)         http://www.lookbio.com/threestyle/lookbio/secondcatalog/3123712/1.html